[发明专利]一株贝莱斯芽孢杆菌及其发酵饲料降解微生物毒素与应用

说明书

本发明涉及诱变筛选的一株贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)BL‑14及其高效降解饲料原料中呕吐毒素（DON）、黄曲霉毒素（AFB1）和玉米赤霉烯酮（ZEN）的液体混合菌液。该菌株BL‑14（CGMCC No.22083）具有丰富的水解酶体系，可产淀粉酶、蛋白酶和纤维素酶等，与植物乳杆菌1.2158（CGMCC）、凝结芽孢杆菌1.6565（CGMCC）组合而成的混合菌剂，进行饲料原料发酵，可将原料中呕吐毒素降解83.25%，降解黄曲霉毒素（AFB1）降解90.09%，玉米赤霉烯酮降解80.76%，发酵后的饲料中乳酸含量达到36.5g/Kg，饲料品质优良。

技术领域

本发明属于微生物发酵技术领域，涉及多种微生物发酵降解呕吐毒素的方法与应用。更具体的说是一株降解呕吐毒素的贝莱斯芽孢杆菌及其发酵饲料降解微生物毒素的应用。

背景技术

脱氧雪腐镰刀菌烯醇（deoxynivalenol，DON）又名呕吐毒素（DON），是由镰刀菌属所产生的一种单端胞霉烯族毒素,在禾本科作物生长过程中极易感染的镰刀菌属病害，导致采收后各主要粮食籽粒被毒素污染。同时,在饲料的加工和储存中，粮食类原料极易由于霉变而产生各种霉菌毒素，其中以呕吐毒素污染最为广泛。呕吐毒素是饲料及饲料原料中污染最普遍的霉菌毒素，有报导调查分析2019年山东、河南、江苏、东北等地区，呕吐毒素在饲料及原料中检出率高达93.22%，超标率达27.42%，在检测的毒素中污染最严重。呕吐毒素具有较强的耐热和耐酸能力，在pH10.0下170℃加热15分钟才能完全破坏，因此在以粮食作物为原料制作的食物和饲料的加工过程中DON基本不被破坏或降解，故广泛的在食物链中流通。呕吐毒素具有较强的毒性，猪摄入0.1~0.2mg/kg的呕吐毒素就会引起呕吐，进而引起食欲下降、生长迟缓、抵抗力下降等危害，若长期给动物喂食含有呕吐毒素的饲料，更是会给养殖业特别是养猪业造成极其巨大的损失。若人体长期食用含呕吐毒素的粮食作物或喂食了呕吐毒素污染饲料的动物及其畜产品，会造成如免疫力下降、软骨组织坏死等极大的危害。此外，在粮食作物贮运加工过程中还存在黄曲霉毒素和玉米赤霉烯酮的污染，同样危害我们人类的食品安全，尤其是饲料安全。

上述三种微生物导致的毒素的脱除方法有物理法、化学法和生物法。物理方法会对粮食造成营养流失，同时可能产生新的有害物质，且成本大；化学法去除呕吐毒素，污染大，可能增加新的未知物质；生物处理过程温和且利于大规模使用，特别是微生物法脱除呕吐毒素是目前最经济有效的方法。而在饲料生产中，最常用的是物理剔除和吸附法，剔除法主要指的是将受霉菌污染的颗粒、种皮等剔除，消减霉变粒从而显著降低毒素含量。剔除法只适合前期的脱除和预防处理，对原料中已产生的呕吐毒素作用不大。吸附法是处理霉变饲料最常用的物理方法，指在饲料中添加具有吸附毒素功能的吸附剂，通过吸附剂与毒素的稳定结合来去除毒素。但是大部分吸附剂不具有选择性，饲料中的维生素、微量元素等营养物质也会被吸附，同时，吸附剂与呕吐毒素的结合在动物肠道中在消化酶或肠道微生物的影响下并不稳定，从而可能导致呕吐毒素在动物肠道内重新释放，有时甚至会使局部毒素浓度剧增导致危害。

所以，为方便、快捷、低成本且有效地减少饲料原料中污染的呕吐毒素，筛选可高效降解呕吐毒素、安全无害的饲料发酵用菌种，研发出一种可用于饲料添加的微生物菌剂，脱除原料中的呕吐毒素并生产优质的发酵饲料，以此减少养殖业中由于呕吐毒素带来的风险和成本，增加其经济效益。

发明内容

为实现上述目的，本发明公开了如下的技术内容：

本发明通过筛选获得高效降解呕吐毒素的贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)BL-14菌株，本发明自行从自然界土壤中分离，可降解呕吐毒素菌株，然后对其进行诱变筛选，获得高效降解呕吐毒素的贝莱斯芽孢杆菌BL-1，其特征在于，所述BL-14菌株在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(GCMCC)保藏，保藏编号为CGMCC No.22083。保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏日期：2021年3月29日，