[发明专利]一种石油烃降解菌株及其筛选和应用

说明书

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种石油烃降解菌株及其筛选与应用。所述菌株分类命名为蜡样芽胞杆菌（Bacillus cereus）LY‑1，已于2022年2月28日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2022157，其16S rRNA序列如SEQ ID No.3所示。该油砂油降解菌株是从印尼油砂中筛选分离得到的，其对石油烃类化合物具有高效的降解性能，具有很好的应用前景。

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种石油烃降解菌株及其筛选与应用。

技术背景

随着能源的枯竭和石油污染的加深，非常规能源油砂油逐渐引起关注，但常规提取油砂油方法能耗高，对环境污染严重，使用无污染的微生物预处理油砂油，转化油砂油中粘稠组分，促进油砂油的分离具有十分广阔的前景。另一方面，在处理石油污染物方面，与传统的物理、化学法相比，微生物处理石油污染物有着低成本，对环境几乎没有破坏等优势。

国内外研究已证明强壮类芽孢杆菌（Paenibacillusehimensis）、地衣芽胞杆菌（B. licheniformis）、三色拟迷孔菌（Daedaleopsis sp）、黄曲霉（Aspergillus spp）、螯台球菌（Chelatococcus daeguensis）等微生物具有将重质油转化为轻质油、降低重质油粘度达到稠油增产的能力。因此通过特异性筛选出特定降解能力的微生物，利用其特有优势解决非常规能源利用与石油污染问题提供生物支持。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一株石油烃降解菌株LY-1。

本发明的第二目的在于提供上述一株石油烃降解菌株LY-1的筛选方法。

本发明的第三目的在于提供上述一株石油烃降解菌株的应用。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明首先提供了一种石油烃降解菌株LY-1，所述菌株分类命名为蜡样芽胞杆菌（Bacillus cereus）LY-1，已于2022年2月28日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为湖北省武汉市武昌区八一路299号，保藏编号为CCTCC NO：M 2022157，其16S rRNA序列如SEQ ID No.3所示。

进一步的，上述石油烃降解菌株LY-1为革兰氏染色阴性专性需氧细菌，菌体棒状，在LB固体培养基平板上菌落呈圆形、淡黄色不透明、表面光滑湿润、边缘规则、无晕环、中央凸起。

进一步的，上述石油烃降解菌株LY-1是从印尼油砂中筛选分离得到的；其中，印尼油砂为褐色，有黏性，含油量为20.2 %，砂粒粒径为40目。

本发明还提供了上述一种石油烃降解菌株LY-1的筛选分离方法，包括以下步骤：

1）取5g风干后的印尼油砂颗粒加入100mL富集培养基中，在35℃、100rpm条件下富集培养21天，吸取1mL富集培养菌液加入至100mL含有油砂油的分离培养基中继续培养21天；

2）待步骤1）培养结束后，吸取1mL菌液加入至无菌生理盐水中，稀释成10^-5的稀释液，取梯度稀释液涂布于LB固体培养基平板上，在35℃下培养48小时，选择不同形态的单菌落，分别在LB固体培养基平板上进行划线分离，重复划线分离操作，直至形成形态单一的纯化菌落；