[发明专利]外泌体微球混悬液及其制备方法

说明书

本申请涉及生物提取工艺技术领域，尤其涉及一种外泌体微球混悬液及其制备方法。该外泌体微球混悬液的制备方法包括如下步骤：获取外泌体；配制多糖混悬液；将外泌体和多糖混悬液进行混合处理得到混合溶液，将混合溶液进行喷雾处理得到颗粒微球；将颗粒微球分散在胶原基质溶液中得到外泌体微球混悬液。该制备方法工艺简单、成本低，而且可以得到性能稳定、缓释外泌体的外泌体微球混悬液，从而便于存储和保持外泌体的性能，因此在外泌体的存储和组织培养领域具有很好的应用前景。

技术领域

本申请属于生物提取工艺技术领域，尤其涉及一种外泌体微球混悬液及其制备方法。

背景技术

外泌体(Exosomes)是指包含了复杂RNA和蛋白质的小膜泡，一般指直径在40～100nm的盘状囊泡。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体，其主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。目前，外泌提取方法有超速离心、试剂盒、超滤法、蔗糖密度梯度离心等。

骨髓间充质干细胞(Bone mesenchymal stem cells，BMSCs)是人们在哺乳动物的骨髓基质中发现的一种具有分化形成骨、软骨、脂肪、神经及成肌细胞的多种分化潜能的细胞亚群。它们对骨髓中的造血干细胞(HSC)不仅有机械支持作用，还能分泌多种生长因子(如IL-6，IL-11，LIF，M-CSF及SCF等)来支持造血，因此BMSCs中的外泌体在骨微环境和骨代谢中发挥重要作用。

为了更好地研究外泌体，常将外泌体与目标物如组织细胞或支架材料一起培养，然而单纯的外泌体存储不方便，容易影响其作用，与目标物一起培养时外泌体通常难以正常发挥生物学功能。因此，现有技术有待改进。

发明内容

本申请的目的在于提供一种外泌体微球混悬液及其制备方法，旨在解决解决现有如何更好地存储外泌体，以便研究和发挥其性能的技术问题。

为实现上述申请目的，本申请采用的技术方案如下：

第一方面，本申请提供一种外泌体微球混悬液的制备方法，包括如下步骤：

获取外泌体；

配制多糖混悬液；

将所述外泌体和所述多糖混悬液进行混合处理得到混合溶液，将所述混合溶液进行喷雾处理得到颗粒微球；

将所述颗粒微球分散在胶原基质溶液中得到外泌体微球混悬液。

在一实施例中，所述多糖混悬液选自壳聚糖混悬液。

在一实施例中，所述将所述混合溶液进行喷雾处理得到颗粒微球的步骤包括：将所述混合溶液通过4～6℃的恒温喷头，喷射在-20℃至-15℃的温度环境中，得到所述颗粒微球。

在一实施例中，所述颗粒微球的粒径为2～200μm。

在一实施例中，在得到所述颗粒微球后还包括：将所述颗粒微球依次经过2000目筛和5000目筛，得到粒径为2～6μm的所述颗粒状微球。

在一实施例中，所述将所述颗粒微球分散在胶原基质溶液中得到外泌体微球混悬液的步骤包括：先将所述颗粒微球溶于水中，然后按体积比1：18～20与所述胶原基质溶液混合，得到所述外泌体微球混悬液。

在一实施例中，所述胶原基质溶液的质量分数为3.5～4.5％。

在一实施例中，所述外泌体来源于骨髓间充质干细胞。

第二方面，本申请提供一种外泌体微球混悬液，所述外泌体微球混悬液由本申请所述的制备方法制备得到。

在一实施例中，所述外泌体微球混悬液的存储温度为2～4℃。