[发明专利]一种鉴定黑森瘿蚊的引物对及其鉴定方法

说明书

本发明提供了一种鉴定黑森瘿蚊的引物对，引物对包括上游引物HFSP‑1和下游引物HFSP‑2；上游引物HFSP‑1的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示，上游引物HFSP‑2的核苷酸序列如SEQIDNO:2所示。还提供了鉴定方法，用上游引物HFSP‑1和下游引物HFSP‑2对待测样本的DNA进行PCR扩增，若出现170bp的DNA条带，则待测样本为黑森瘿蚊。本发明为黑森瘿蚊的鉴定提供简便稳定的分子标记，解决黑森瘿蚊快速、准确鉴定的技术难题。

技术领域

本发明属于黑森瘿蚊鉴定技术领域，具体涉及一种鉴定黑森瘿蚊的引物对及其鉴定方法。

背景技术

黑森瘿蚊(Mayetiola destructor(Say))属双翅目(Diptera)、瘿蚊科(Cecidomyiidae)、瘿蚊亚科(Cecidomyiinae)、喙瘿蚊属(Mayetiola)，是世界性小麦重要害虫，也是我国进境植物检疫害虫。

黑森瘿蚊在各地一年可发生1-6代不等，具有兼性滞育习性。以三龄幼虫在围蛹内潜藏于冬小麦植株或小麦残留麦茬上越冬。翌年春天，越冬幼虫发育化蛹。成虫不取食，寿命约3d。卵多产于寄主叶片正面脉沟中，经3-10d孵化。初孵幼虫沿脉沟爬入叶鞘取食。单头幼虫取食即可造成小麦植株生长受阻，甚至死亡而造成经济损失。除小麦外，还可取食为害大麦、黑麦、冰草属植物、葡萄龙牙草以及其他多种禾本科牧草和杂草。黑森瘿蚊在国内适生区广泛，我国65％的麦区均适于其定殖发生，一旦在国内扩散蔓延，将对我国小麦安全生产构成严重威胁。因此，加强进境检疫与国内疫情防控对于预防其扩散蔓延意义重大。

目前，黑森瘿蚊的鉴定识别依赖成虫的形态鉴定，成虫主要鉴别特征如下：体形似小蚊，灰黑色。体长3-4mm，雌虫大于雄虫。头、复眼和胸部背面黑色，胸侧和腹部黄褐色或红褐色。下颚须4节，第一节短，第二节较粗，第三节较长，第四节长于第三节的1/3。触角黄色或黄褐色， 16-18节，雄虫多为17节，雌虫多为16节。触角基节铁钻形，梗节球形，鞭节圆锥形，有环丝，具有直立短毛。雄虫触角鞭节有近透明的细长柄。胸部背面有2条明显的纵纹；小盾片黑色，具有黑毛。翅较宽，翅面密布短毛，后缘毛较长。翅脉简单，前缘脉(C)淡褐色，基部粉红色；第一纵脉(R₁)很短，几乎与前缘脉合并，与翅前缘中部相接；第二纵脉(Rs) 较发达且直，至近翅尖时稍向下弯，在翅尖之前与后缘相接；Cu脉分叉处和Cu2脉与后缘的相接处，以及R1脉的末端几乎在一条直线上。平衡棒发达，淡红色，覆不均匀的黑色鳞片。足细长，跗节5节，第Ⅰ节最短，第Ⅱ节最长，第Ⅴ节近末端具一对爪，弯曲细长，两爪间有一爪间突，有爪垫一个，长于爪，雌、雄爪均单一无齿。腹部各节背板两侧各具有一大方形黑斑点。雌虫产卵管由3节组成，圆柱形，淡粉红色，末节端部为褐色。雄虫腹部末节淡粉红色，具一对褐色抱握器，生殖器位于其中，上生殖板较宽，上面有许多感觉孔，缺刻深凹入，多数呈“V”形，少数略呈“U”形。下生殖板较窄，两侧端部一般可见4-5个乳头状突起。尾铗二节，第一节粗壮，第二节细长，长近于宽的4倍，末端生爪。

形态鉴定方法对标本的完整性和鉴定者的专业水平均要求较高，且在进境传播中截获的主要虫态为幼虫和蛹，采用形态鉴定方法远远不能满足口岸检疫快速、准确的要求；在国内疫情监测中，采用性诱捕技术时，会诱捕到非靶标种类，且捕获的虫体往往破损，不利于形态识别。因此，无论是口岸检疫工作还是生产一线疫情监测，均亟需一种快速、准确、可靠的黑森瘿蚊种类鉴定技术。

发明内容

本发明针对上述生产需求与技术问题，提供一种鉴定黑森瘿蚊的引物对及其鉴定方法，该黑森瘿蚊的引物为黑森瘿蚊的鉴定提供简便稳定的分子标记，解决区分黑森瘿蚊的难题，为今后黑森瘿蚊的检疫检验、疫情监测与防控奠定了基础。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种鉴定黑森瘿蚊的引物对，所述引物对包括上游引物HFSP-1和下游引物HFSP-2；所述上游引物HFSP-1的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述上游引物HFSP-2 的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。