[发明专利]一种适用于芳香药用植物牛至多倍体诱导和培育的方法

权利要求书

1.一种牛至四倍体植株诱导和培育的方法，其特征在于，将牛至无菌苗茎段上萌动的腋芽在离体培养基上进行秋水仙素诱导，经过秋水仙素诱导的芽生长至至少具有3对叶片时，剪取叶片，用流式细胞仪进行检测，确定倍性，再通过配套的离体快繁技术扩增，获得四倍体牛至植株，

其中，所述的无菌苗的获得方式为：选取健康、无病虫害的牛至嫩梢作为外植体，表面灭菌后，接种于1/2MS + 0.1~0.5 mg/L 6-BA + 3%蔗糖的启动培养基中，待外植体恢复生长后接种于MS + 0.5~1.0 mg/L 6-BA + 3%蔗糖的扩增培养基中，获得大量长势一致的无菌苗；

所述的秋水仙素的诱导方法为：配制诱导培养基MS + 0.5~1.0 mg/L 6-BA + 0.05~0.2 mg/L IBA + 3%蔗糖，趁灭菌后的诱导培养基未冷却固化前，量取诱导培养基灌装于无菌容器内，待诱导培养基充分冷却固化后，将所述的无菌苗剪成只有一个节的茎段，接种至所述诱导培养基中，使茎段叶腋处低于诱导培养基上表面，观察茎段腋芽的萌动情况，3~6天后，吸取0.1%秋水仙素无菌溶液，分次均匀滴加至上述容器内，置于黑暗环境中培养，所述诱导培养基与所述秋水仙素无菌溶液的体积比为10:0.1~1；24~72小时后将茎段从诱导培养基中取出，用无菌水清洗2~4次，接种至MS + 0.05~0.2 mg/L 6-BA + 0.05~0.1 mg/LNAA + 2%蔗糖的恢复培养基中；

所述的配套的离体快繁技术包括：将鉴定为四倍体的诱导芽剪成具有一个节的茎段，接种于1/6~2/3MS + 1/3~2/3N6 + 0.5~2.0 mg/L 6-BA + 0.1~0.3 mg/L IBA + 3%蔗糖的增殖培养基中，20~25天后将茎段上分化出的不定芽分段剪下接种于MS + 0.1~0.3 mg/L6-BA + 0.05~0.2 mg/L NAA + 3%蔗糖的壮苗培养基中，培养7~10天获得生长一致的牛至四倍体无菌苗，将获得的牛至四倍体无菌苗接种于1/2MS + 0.1~0.5 mg/L NAA + 2%蔗糖的生根培养基中进行生根培养，生根培养10~15天后，将牛至四倍体生根苗连同培养容器转移至温室，打开容器盖炼苗5~7天，栽种于常规培养基质中，正常管理。

2. 如权利要求1所述的牛至四倍体植株诱导和培育的方法，其特征在于，外植体表面灭菌方法为：用洗洁精水浸泡10~20 min后自来水冲洗5~8次至无洗洁精残留，转移至超净工作台内，加入75%酒精表面消毒10~30 s，无菌水冲洗2次，用0.1~0.2%升汞消毒4~8 min，无菌水冲洗6~8次。

3.如权利要求1所述的牛至四倍体植株诱导和培育的方法，其特征在于，0.1%秋水仙素无菌溶液的制备方法为：将秋水仙素用二甲基亚砜助溶后配制成0.1%的溶液，高压灭菌。