[发明专利]一种具有促进大菱鲆卵巢发育功能的重组蛋白

说明书

本发明提供一种具有促进大菱鲆卵巢发育的重组蛋白，所提供的重组蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2；改造后的重组蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:8。本发明所提供的重组蛋白可用于促进大菱鲆性腺发育。本发明采用重叠PCR技术将大菱鲆重组促性腺激素α亚基与β亚基进行拼接，采用毕赤酵母表达体系进行重组促性腺激素的表达，真核表达体系能进行复杂的翻译后修饰，有益于重组蛋白的活性。本发明成功表达的大菱鲆重组促性腺激素融合蛋白经过卵母细胞体外培养，可明显促进大菱鲆卵母细胞的成熟。

技术领域

本发明属于海水鱼类养殖技术领域，具体涉及一种具有促进大菱鲆卵巢发 育功能的重组蛋白。

背景技术

大菱鲆(Scophthalmus maximus)是当前欧洲的重要海水养殖鱼类之一，自 1992年大菱鲆被引进中国以来，在水产科研工作者和养殖企业的共同努力下， 经过近30年发展，大菱鲆在工业化养殖领域取得了重大成效，产量稳定在5万 吨以上，年产值逾40亿元，从而成为我国水产养殖业一个新的经济增长点。

大菱鲆在人工养殖条件下，不能自发性产卵受精，在其繁殖过程中需要通 过光照和温度调控，促进卵巢的发育，而后通过注射相关生殖调控激素促进卵 母细胞细胞成熟后，通过人工挤卵的方式获取成熟卵子，进行体外受精孵化。 研究表明，卵母细胞的最后成熟和排卵受促性腺激素(卵泡刺激素FSH和黄体 生成素LH)直接调控，其中FSH刺激卵巢组织分泌产生雌二醇促进卵母细胞 成熟、LH促进卵母细胞由卵巢壁排入卵巢腔，因此，注射特异性促性腺激素 (FSH和LH)是稳定批量获取高质量成熟卵子的关键。

目前在大菱鲆苗种繁育和雌性亲鱼生殖调控实际生产过程中，并未研发出 针对大菱鲆雌性亲鱼的特异性促性腺激素蛋白，通常采用鱼类通用型催产催熟 激素对卵子进行催熟和催产，虽然能批量获取成熟卵子，但卵子质量和效果不 稳定，存在批次间差异，同时非特异性催产催熟激素也严重影响大菱鲆雌性亲 鱼卵巢发育，缩短雌性亲鱼生殖年限。同高等哺乳动物不同，促性腺激素是由 两个亚基形成的结构异二聚体糖蛋白，即由一个共有α亚基(CGα)与一个特 异性β(FSHβ、LHβ)亚基组成的异二聚体，特异性的β亚基赋予其功能特异 性。由于促性腺激素的特异性，两种亚基结合时才会产生生物学效应。而且鱼 类存在种属间差异，如何实现大菱鲆α亚基(CGα)与β亚基(FSHβ、LHβ) 连接后的高效表达，纯获得高活性的蛋白，进而用于亲鱼催产催熟，是目前急 需突破的技术瓶颈。

发明内容

本发明的目的是提供一种具有促进大菱鲆卵巢发育的重组蛋白，该重组蛋 白能够有效的促进大菱鲆卵巢发育，从而弥补现有技术的不足。

本发明首先提供一种重组蛋白，所述的重组蛋白为CF或CL， CF的氨基酸序列如下：

MVTATTTMGSVRSAVLSFLLLSFFLHIADSYPNIDASNMGCEECKLRKNS LFSGDHPVYQCMGCCFSKAYPTPLKTIKTMMIPKNITSEATCCVAKNSYESVF QTDVGVGIKVRNHTECHCSTCFFHKIMQLVVMAAVLAMAGTGQGCSLGCKL ANITLRVESCGVTEVIETTECSGLCHNQDPNYIGNGDMDEQKICNGDWSYEA KHINGCPVAARYPVASNCRCTTCDEDSTYCGRTPRYMPSCFSR(SEQ ID NO:1)；

CL的氨基酸序列如下：