[发明专利]一种抗人CD34抗体、抗人CD34嵌合抗体及应用

说明书

本发明提供了一种抗人CD34抗体、抗人CD34嵌合抗体及应用，小鼠抗人CD34抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述的小鼠抗人CD34抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明所述的抗人CD34嵌合抗体对于血液病的诊断治疗、实体瘤的治疗、鉴别肿瘤良恶性及起源有着重要意义，在器官移植、造血干细胞移植等领域具有广阔的应用前景；小鼠抗人CD34抗体的轻链可变区基因和重链可变区基因及其表达载体，两者重组后表达产生的抗CD34嵌合抗体，能够特异性结合人CD34分子并能够降低鼠源性抗人CD34抗体的背景及免疫源性。

技术领域

本发明属于体外诊断领域，尤其是涉及一种抗人CD34抗体、抗人CD34嵌合抗体及应用。

背景技术

白血病是威胁人类生命健康的主要几种疾病之一，在我国发病率大约为2.76/100000人。其中急性淋巴细胞白血病多见于儿童，急性髓系白血病多见于成年人，而慢性白血病多发于40岁以上人群。它是一类起源于造血 (或淋巴) 干细胞的恶性疾病。由于干细胞受损，白血病细胞失去进一步分化成熟的能力，或者增殖与分化能力不平衡，而停滞在细胞发育的不同阶段，具体表现为细胞在体内无限增殖，而其分化成熟和凋亡受阻。白血病与其它癌症一样，一直因为没有特应性的标志导致无法用常规药物准确杀伤白血病细胞。白血病细胞与正常细胞的区别目前认为主要在于某些生物分子的表达量不同，利用这些特征，特别是与造血干/祖细胞的区别可以在一定程度上杀伤白血病细胞而不影响造血的重建。特异性识别某种细胞膜表面分子的抗体正是实现这一目的的最好工具，目前利用抗体治疗白血病主要是通过以下三种途径：抗体结合白血病细胞后通过补体依赖的细胞毒和抗体依赖细胞介导的细胞毒直接杀伤白血病细胞；抗体结合白血病细胞表面分子，通过所引发的下游信号诱导白血病细胞分化或凋亡；通过抗体的靶向作用将杀伤性药物或效应物带入白血病细胞内达到局部杀伤的目的等。

CD34分子于1984年被美国科学家civin发现，属于钙黏蛋白家族，其结构包括胞外区、跨膜区、胞浆区3部分。作为一种黏附分子，CD34分子选择性地表达于人类及其他哺乳动物造血干/祖细胞（hematopieticstem/ progenitor cell，hsc/hpc）表面，并随细胞的成熟逐渐减弱至消失。细胞间的黏附是由多种机制和因素参与的复杂过程，在多细胞生物个体的演化过程、细胞调节、组织生理学以及疾病发生中都有着至关重要的作用。黏附分子以受体－配体结合的形式发挥作用，参与细胞的识别、活化和信号转导、细胞的增殖与分化、伸展与移动，是免疫应答、炎症发生、凝血、肿瘤转移以及创伤愈合等一系列重要生理病理过程的分子基础。在造血干细胞移植过程中，CD34分子起到运输造血干细胞(hematopietic,hsc)的作用，在动员剂的作用下，促使hsc迁离骨髓进入外周血完成动员过程，并介导其与骨髓微环境的结合增强hsc定植。

随着对CD34分子介导细胞间黏附作用机制探讨的广泛深入，已有愈来愈多的研究结果表明除造血干/祖细胞外，还有许多其他类型的细胞也表达CD34分子，如某些类型的白血病细胞、实体瘤细胞、血管内皮细胞及纤维母细胞等。迄今为止，CD34分子介导黏附作用的机制尚未完全阐明，对CD34分子特异配体/受体的鉴定和细胞内蛋白分子的相互作用激活黏附分子（尤其是选择素家族）的作用机制亦尚待进一步明确。由于细胞间黏附作用密切参与体内免疫应答、炎症发生、凝血、肿瘤转移以及创伤愈合等一系列重要生理病理过程，对CD34分子作用机制的明确以及进一步加以应用，在临床上对于血液病的诊断治疗、实体瘤的治疗、鉴别肿瘤良恶性及起源有着重要意义，在器官移植、造血干细胞移植等领域具有广阔的应用前景。

以上这些事实均表明 CD34 分子可应用于白血病诊断治疗、器官移植、造血干细胞移植领域，CD34分子的抗体具有巨大的潜在药用价值。

目前白血病治疗主要采用控制增殖、诱导凋亡的化疗药物，包括烷化剂、抗代谢药物等。这些药物在杀死白血病细胞的同时，对正常造血细胞也有严重损伤，故对机体存在严重的毒副作用。此外，白血病细胞常会对化疗药物产生耐药，同时化疗后复发率较高，严重影响临床化疗药物治疗的有效性。

发明内容