[发明专利]一种培养肠印戒细胞癌类器官培养基

说明书

本发明公开了一种肠印戒细胞癌肿瘤(肠SRCC)类器官的培养基及其培养方法。通过调整培养基各组分的含量，能够实现对肠SRCC样本的类器官培养，大大提高了肠SRCC类器官培养成功率，缩短培养周期，并且大大降低了培养成本，提高应用范围，为揭示肠SRCC发病机理和筛选抗癌药物奠定了基础。

技术领域

本发明涉及细胞培养领域，具体的涉及一种肠印戒细胞癌类器官的培养基及其培养方法。

背景技术

自从1979年世界卫生组织提出结直肠癌(colon and rectum cancer，CRC)的组织学分类以来，结直肠印戒细胞癌(signet ring cell carcinoma，SRCC)就作为其中的一种病理分型而存在，这个分类标准是在常用的TNM分期和分级系统之外存在的，至今仍然有效。CRC作为全球第三大癌症，其发病率和死亡率分别位居世界第3和第4位，其发病率与人民生活水平的提高呈正相关。结直肠SRCC是所有CRC中罕见的特殊类型，具有独特的临床病理特征和预后，与普通结直肠腺癌相比，结直肠SRCC5年存活率仅为27％，远低于CRC患者5年平均生存率66.5％，其预后较差的原因主要是临床无特别有效的治疗方式，基于AJCC分期系统，结直肠SRCC被认为是预后不良的独立预后指标。

肿瘤类器官(tumor organoid)一般是指由肿瘤患者肿瘤组织体外培养而来的类器官。肿瘤类器官能在病理学形态、基因变异、染色体稳定性和肿瘤异质性等方面忠实模拟所对应患者体内肿瘤，因此肿瘤类器官是指导肿瘤精准治疗的绝佳工具。目前大量转化医学研究成果证实，患者来源肿瘤类器官体外对各种疗法的反应能较为准确地模拟所来源患者的肿瘤体内对临床治疗的疗效。因此建立结直肠SRCC类器官，并进行大规模药物筛选测试对发现可及性新药物和改善结直肠SRCC患者预后至关重要。目前全球只有一篇肠SRCC类器官建立报道(Carcinogenesis)且只成功培养了1例，但文中培养基含有胎牛血清，严格意义上不能算肠SRCC类器官培养基。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种无血清且能稳定培养肠SRCC类器官的培养基，进而获得肠印戒细胞癌类器官，以便能够研究肠印戒细胞癌发病机制和病程以及筛选相关抗癌药物。

为解决上述技术问题，本发明第一方面提供一种肠印戒细胞癌的类器官培养基，所述培养基成分包括如下三个重要组成部分，分别是:

基础培养成分：DMEM/F12培养基：1640培养基(0.5-5)，Holo-Transferrin(5-50mg/L)，Insulin(1-20mg/L)，β-巯基乙醇(0.01-50mM)，BSA(0.1-10％)。

常规添加因子：R-spondin 1(50-1000ng/ml)，Noggin(10-200ng/ml)，N2：B27(0.1-2)，GlutaMAX Supplement(1×)，HEPES(1×)，Nicotinamide(1-100mM)，Normocin^TM(1×)，N-Acetylcystine(0.1-10mM)。

选择因子，具体组成如下：

优选的，所述培养基中还包括A83-01，进一步优选的，所述A83-01浓度为0.1-50μM。

优选的，所述培养基中还包括FGF4，进一步优选的，所述FGF4浓度为20-500ng/ml。

优选的，所述培养基中还包括EGF，进一步优选的，所述EGF浓度为10-200ng/ml。

优选的，所述培养基中还包括FGF10，进一步优选的，所述FGF10浓度为50-1000ng/ml。

优选的，所述培养基中还包括DMSO，进一步优选的，所述DMSO浓度为培养基体积比的0.1-5％，V/V。