[发明专利]一种CTB/LTB多肽与VP8的融合蛋白及轮状病毒疫苗

说明书

本发明公开了一种CTB/LTB多肽与VP8的融合蛋白，其氨基酸序列包括人轮状病毒VP8蛋白氨基酸片段和外源多肽片段组成，所述外源多肽片段为CTB‑1、CTB‑2和/或LTB‑1，所述CTB‑1的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，LTB‑1的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，CTB‑2的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示，所述VP8蛋白氨基酸片段是人轮状病毒Wa株蛋白的氨基酸片段第64‑223位氨基酸序列，其氨基酸序列如SEQ ID NO:3。本发明从CTB和LTB中筛选出多肽片段CTB‑1、CTB‑2和LTB‑1，将多肽片段与轮状病毒的VP8蛋白进行融合表达，分别纯化得到3个多肽‑VP8融合蛋白，具有较好的蛋白水溶性，并且能产生高免疫原性。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体涉及一种CTB/LTB多肽与VP8的融合蛋白及轮状病毒疫苗。

背景技术

轮状病毒引起的腹泻是5岁以下儿童最常见的疾病之一。一个孩子在5岁前的几个月里都患有腹泻，这些症状也与成长缓慢有关（Glass R I ,Lang D R ,Ivanoff B N , etal. Introduction: Rotavirus-From Basic Research To A Vaccine[J]. Journal ofInfectious Diseases(Supplement_1):S1.）。这些数据引发了儿科医生和公共卫生专家的关注，预防和治疗轮状腹泻疾病成为提高儿童存活率的一个关键目标。

早在1998年，Wyeth推出了口服的轮状病毒疫苗Rotashield，使用一年期间，发现接种的儿童发生肠套叠的风险增高，因此，产品不得不撤市。后来Merck和GSK分别推出了口服轮状病毒活疫苗，这两个产品在全球80多个国家广泛应用，对控制轮状病毒造成的严重脱水性腹泻，以及其引起的住院和儿童死亡起到非常好的保护作用。由于口服轮状病毒活疫苗在低收入国家只有大约60%的保护作用，尽管如此，许多这些国家的疫苗覆盖率仍保持在大约70%（Glass RI, Jiang B, Parashar U. The future control of rotavirusdisease: can live oral vaccines alone solve the rotavirus problem. Vaccine2018; 36:2233–6），仅口服活疫苗无法完全控制轮状病毒疾病，人们未来想控制严重轮状病毒疾病的造成的公共卫生健康问题，新一代疫苗的研究将是非常必要的。

发明内容

为构建高可溶性的重组亚单位疫苗，本发明提供了一种CTB/LTB多肽与VP8的融合蛋白，此融合蛋白具有高免疫原性和较好的可溶性。还公开了一种轮状疫苗，能使得免疫机体产生较高的特异性抗体IgG、IgG1和IgG2a。

本发明通过下述技术方案实现：

一种CTB/LTB多肽与VP8的融合蛋白，其氨基酸序列包括人轮状病毒VP8蛋白氨基酸片段和外源多肽片段组成，所述外源多肽片段为CTB-1，CTB-2和/或LTB-1，所述CTB-1的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，LTB-1的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，CTB-2的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示，所述VP8蛋白氨基酸片段是人轮状病毒Wa株蛋白的氨基酸片段第64-223位氨基酸序列，其氨基酸序列如SEQ ID NO:3。

融合蛋白为（1）CTB-VP8 P[8]，其氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示；（2）LTB1-VP8 P[8]，其氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示。3）CTB2-VP8 P[8]，其氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示。

一种轮状病毒疫苗，包含如前所述的融合蛋白。

进一步的，所述融合蛋白为10-100微克。

进一步的，还包含医学上可适用的佐剂。

进一步的，所述融合蛋白和佐剂体积比为1：1。