[发明专利]一种细胞免疫调节蛋白及其应用

说明书

本发明涉及基因工程技术领域，尤其是涉及一种细胞免疫调节蛋白及其应用，所述细胞免疫调节蛋白为pIL‑18BP‑X2，且所述pIL‑18BP‑X2的氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示。本发明从猪肺泡巨噬细胞(PAM)获得的细胞免疫调节蛋白pIL‑18BP‑X2在大肠杆菌表达系统中可实现高效表达，并且经NI柱纯化后可得到单一性蛋白；其是具有降低猪干扰素伽马(pIFN‑γ)分泌的小分子蛋白质，可显著抑制pIFN‑γ的mRNA表达量，调节pIFN‑γ的活性的效果，具有治疗应用潜力。因此，本发明的pIL‑18BP‑X2蛋白，丰富了细胞免疫调节剂，为临床上调节细胞免疫提供了很好的帮助。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，尤其是涉及一种细胞免疫调节蛋白及其应用。

背景技术

细胞免疫是把双刃剑，免疫太弱会使机体更容易感染病原微生物，而免疫太强会导致免疫细胞疯狂地攻击发炎部位周边的细胞、组织、器官，引起免疫过激反应，造成对自身的损害，从而引发“细胞因子风暴”。

研究发现，IL-18mRNA在多种细胞(单核细胞、血管平滑肌细胞及内皮细胞等)中表达，并在含有这些细胞的器官及组织(肝、肾、骨骼肌等)中可检测到IL-18mRNA的表达。IL-18具有多种有效的生物学功能，可通过诱导T细胞及自然杀伤细胞产生IFN-γ的作用，在抗感染、免疫调节、抗肿瘤及慢性炎性疾病的发生发展中扮演着重要角色。

目前，在发生结肠炎的患者中，干扰素-γ可以促进炎症并加剧肠道内的炎症反应，从而加重沙门氏菌引起的结肠炎，细胞免疫可以加重疾病的严重程度，此时应用本发明提供的蛋白可降低干扰素-γ的分泌，降低炎症反应。研究表明，IL-18与重组IL-18bp结合可通过干预关键炎症相关通路和杀伤细胞凋亡保护小鼠肝脏免受炎症损伤。

根据人类疾病发展与IL-18BP的关系研究，具有调节免疫作用的IL-18BP在猪的疾病康复过程中也具有良好应用前景，目前国内外对猪IL-18BP的研究尚处于空白。

本发明提供的细胞免疫调节蛋白(pIL-18BP-X2)是通过基因工程方法从猪肺泡巨噬细胞(PAM)获得，其具有降低猪干扰素伽马(pIFN-γ)分泌的作用。该蛋白能高亲和力与IL-18结合并抑制IL-18相关的生物学活性,从而降低其所参与的炎性反应，丰富了细胞免疫调节剂。并且，本发明提供的细胞免疫调节蛋白可在大肠杆菌大量表达制备便于纯化。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新型的细胞免疫调节蛋白，丰富了细胞免疫调节剂，为临床上调节细胞免疫提供了帮助。

根据本发明实施例的第一方面，提供一种细胞免疫调节蛋白，所述细胞免疫调节蛋白为pIL-18BP-X2，且所述pIL-18BP-X2的氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示。

本发明的细胞免疫调节蛋白pIL-18BP-X2，全长190个氨基酸，理论分子量为21kDa，经证实，本发明的细胞免疫调节蛋白与已证明的细胞免疫调节蛋白同源性低，其为一种新型的可开发利用的免疫调节蛋白，丰富了细胞免疫调节剂。

根据本发明实施例的第二方面，提供一种细胞免疫调节剂，包括上述的细胞免疫调节蛋白，也理应属于本发明的保护范围。

根据本发明实施例的第三方面，提供一种上述细胞免疫调节蛋白的应用，所述细胞免疫调节蛋白在制备细胞免疫调节剂中的应用，也理应属于本发明的保护范围。

根据本发明实施例的第四方面，提供一种表达细胞免疫调节蛋白的基因，所述基因的碱基序列如SEQ IDNO.2所示。

本发明使用PCR方法克隆了表达细胞免疫调节蛋白的基因，该基因全长570bp，其DNA序列如SEQ IDNO.2所示。

根据本发明实施例的第五方面，提供一种制备上述基因的引物组合物，所述引物组合物包括pIL-18BP-X2-F(EcoRI)和pIL-18BP-X2-R(XhoI)；