[发明专利]一种抗BXMAS1嵌合抗原受体及其修饰的免疫细胞及应用

说明书

本发明提供一种抗BXMAS1嵌合抗原受体及其修饰的免疫细胞及应用，所述的抗BXMAS1嵌合抗原受体包括信号肽、能与肿瘤表面抗原BXMAS1结合的抗原识别区结构域、铰链区、跨膜结构域、共刺激信号传导区、CD3ζ信号传导结构域。本发明的抗BXMAS1嵌合抗原受体的结构稳定性高，能特异性识别BXMAS1表面抗原，携带该嵌合抗原受体的免疫细胞可应用于治疗表达BXMAS1抗原的肿瘤，并且具有较好的安全性。

技术领域

本发明属于生物基因领域，具体涉及一种抗BXMAS1嵌合抗原受体及其修饰的免疫细胞及应用。

背景技术

嵌合抗原受体(Chimeric Antigen Receptor，CAR)介导的T细胞(CAR-T)疗法被认为是目前最有望攻克恶性血液系统肿瘤的治疗手段之一。CAR-T疗法是通过基因工程的手段将靶向肿瘤表面抗原的嵌合抗原受体导入患者自体或健康供者来源的T细胞内，从而赋予T细胞以人类白细胞抗原(HLA)非依赖性的形式识别和杀伤肿瘤细胞的能力。过继输注的CAR-T能在患者体内存活相当长的时间并维持免疫记忆功能，从而发挥持久的抗肿瘤效应并行使免疫监视作用，因而被誉为“活体药物”。相比于传统的放、化疗导致的机体免疫功能受损，病情较易复发，以及肿瘤细胞易产生耐药等缺点，CAR-T疗法的毒副作用相对较小且可控，同时抗肿瘤疗效更持久。

多发性骨髓瘤是一种临床常见的严重威胁人类健康的血液系统恶性肿瘤，而B细胞成熟性抗原(BCMA)是目前应用最广泛的针对该疾病的CAR-T疗法的靶标抗原。靶向BCMA的CAR-T疗法在一系列治疗难治复发性多发性骨髓瘤患者的临床实验中取得了令人瞩目的治疗效果，已经被FDA批准上市。然而，研究也发现BCMA作为多发性骨髓瘤CAR-T疗法的靶标有一些局限性。首先，一部分多发性骨髓瘤患者肿瘤细胞本身的BCMA抗原表达水平就很低，无法被BCMA CAR-T所识别，因而不适用BCMA CAR-T疗法；其次，有很多患者在早期对BCMACAR-T治疗有一定的反应性，后期却因发生BCMA抗原表达下降或者丢失引起的免疫逃逸而导致肿瘤复发，针对这类复发患者需要采用针对其他靶标的CAR-T治疗。基于这些原因，我们仍然需要探寻靶向其他抗原的CAR-T疗法以应对患者肿瘤细胞原发性低表达BCMA的问题以及BCMA抗原丢失引起的抗原逃逸和复发。

BXMAS1是Fc受体样基因家族成员之一，在染色体上定位于1q21，其编码的蛋白质与FcγR1具同源性，胞外有9个免疫球蛋白样结构域，胞内有免疫受体酪氨酸抑制性基序结构域。与BCMA相类似，它在正常细胞的表达局限于小部分B细胞和浆细胞表面。BXMAS1在多发性骨髓瘤患者的肿瘤细胞表面高度表达，而且在复发难治性患者的肿瘤细胞表面仍然维持高度表达，因而有望成为CAR-T疗法治疗B细胞恶性肿瘤的一个潜在的分子靶点。已有文献报道靶向BXMAS1的双特异性抗体在体外培养的骨髓瘤细胞以及荷瘤小鼠中表现出明显的抗骨髓瘤效应，同时在食蟹猴中的安全性评价显示其具有较好的安全性，仅对正常B细胞和浆细胞有损伤。值得指出的是，抗体类药物的半衰期较短因而无法发挥持续长久的抗肿瘤疗效，相比较而言，CAR-T能在体内长期存续及扩增从而发挥更持久的抗肿瘤效应，而且目前的技术水平已能有效监视和控制CAR-T引起的不良反应如细胞因子释放综合征等，因此采用CAR-T的手段靶向肿瘤细胞表面的BXMAS1可能更具有前景。

尽管CAR-T所依赖的抗原识别功能结构域大多来源于特异性靶向靶标抗原的单克隆抗体的scFv(由单克隆抗体的重链可变区VH和轻链可变区VL的编码序列通过Linker连接起来)，然而并不是所有识别靶标抗原的scFv都能用来构建CAR的表达载体。CAR只能识别肿瘤细胞膜抗原，因而首先要求所使用的scFv必须能识别肿瘤抗原的胞外结构域。另一方面，并不是所有针对靶标抗原细胞外结构域的scFv都能作为CAR的抗原识别部分。研究表明有多个与scFv相关的因素(对靶标抗原识别的特异性、亲和力以及所识别的抗原表位与细胞膜之间的距离等)会对CAR-T细胞的效应功能产生很大的影响，甚至会导致CAR-T细胞的抗肿瘤效应严重受损。因此，筛选及鉴定出针对特定靶标抗原的适合的scFv对研发出功能完备的CAR-T细胞同样至关重要。

发明内容