[发明专利]一种用于评估卵巢原始卵泡储备量的标志物组合及其应用

权利要求书

1.一种用于评估卵巢原始卵泡储备量的标志物组合，其特征在于，所述标志物组合选自Lhx8、Sohlh1、Nobox、Stk31、Tbpl2、Padi6和Vrtn基因中的至少一个。

2.根据权利要求1所述的一种用于评估卵巢原始卵泡储备量的标志物组合，其特征在于，所述基因的序列如下所示：Lhx8基因的序列如SEQ ID NO.1所示；Sohlh1基因的序列如SEQ ID NO.2所示；Nobox基因的序列如SEQ ID NO.3所示；Stk31基因的序列如SEQ ID NO.4所示；Tbpl2基因的序列如SEQ ID NO.5所示；Padi6基因的序列如SEQ ID NO.6所示；Vrtn基因的序列如SEQ ID NO.7所示。

3.如权利要求1或2所述的用于评估卵巢原始卵泡储备量的标志物组合在制备用于评估卵巢原始卵泡储备量的产品中的应用。

4.一种用于评估卵巢原始卵泡储备量的产品，其特征在于，包括用于扩增如权利要求1或2所述的标志物组合中的基因序列的引物组合物。

5.根据权利要求4所述的一种评估卵巢原始卵泡储备量的产品，其特征在于，所述引物组合物选自下述引物对中的至少一种：

用于扩增Lhx8基因的引物对：如SEQ ID NO.8和SEQ ID NO.9所示；

用于扩增Sohlh1基因的引物对：如SEQ ID NO.10和SEQ ID NO.11所示；

用于扩增Nobox基因的引物对：如SEQ ID NO.12和SEQ ID NO.13所示；

用于扩增Stk31基因的引物对：如SEQ ID NO.14和SEQ ID NO.15所示；

用于扩增Tbpl2基因的引物对：如SEQ ID NO.16和SEQ ID NO.17所示；

用于扩增Padi6基因的引物对：如SEQ ID NO.18和SEQ ID NO.19所示；

用于扩增Vrtn基因的引物对：如SEQ ID NO.20和SEQ ID NO.21所示。

6.根据权利要求4或5所述的一种评估卵巢原始卵泡储备量的产品，其特征在于，所述产品为试剂盒，所述试剂盒还包括RNA提取试剂、RNA逆转录试剂、PCR扩增试剂、对照试剂中的至少一种。

7.一种如权利要求4或5所述的产品的使用方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、采用RNA提取试剂从样本中提取总RNA；

S2、采用RNA逆转录试剂将步骤S1提取的RNA逆转录为cDNA；

S3、采用PCR扩增试剂和引物组合物对步骤S2获得的逆转录产物cDNA进行实时定量PCR扩增。

8.根据权利要求7所述的使用方法，其特征在于，所述步骤S1中采用的样本为小鼠卵巢组织、人活检卵巢组织或卵巢组织片、或其他动物卵巢组织中的一种；和/或，所述步骤S3中PCR扩增程序为：在95.0℃下30秒进行cDNA变性，然后在95℃和60℃下进行40个循环，时间为15秒。

9.一种评估卵巢原始卵泡储备量的方法，其特征在于，包括步骤：采用qRT-PCR的方法对标记物组合中的基因序列进行扩增，检测mRNA的相对表达量；采用所述mRNA的相对表达量通过对应的拟合方程计算原始卵泡数，以进行卵巢原始卵泡储备量的评估；其中，所述标志物组合选自Lhx8、Sohlh1、Nobox、Stk31、Tbpl2、Padi6和Vrtn基因中的至少一个。

10.根据权利要求9所述的一种评估卵巢原始卵泡储备量的方法，其特征在于，所述拟合方程选自以下中的至少一种：

Lhx8基因：y＝1745.593447460678-0.8327115616008314/x；

Sohlh1基因：y＝exp(7.647209536675994-0.0001055515164060347/x)；

Nobox基因：y＝exp(7.71054-0.00174/x)；

Stk31基因：y＝4909.637655898115+480.747502950626*ln(x)；

Tbpl2基因：y＝5419.552518698913+518.0607869674149*ln(x)；

Padi6基因：y＝2925.125123415106+430.7662651255001*ln(x)；

Vrtn基因：y＝4594.831+457.468*ln(x)；

其中，上述拟合方程中，y代表原始卵泡数；x代表mRNA的相对表达量，以Gapdh内参的2^-ΔCt。