[发明专利]一种基于ZNF334基因的检测试剂盒及应用

说明书

本发明公开了一种基于ZNF334基因的检测试剂盒及应用，所述检测试剂盒包含ZNF334基因的甲基化检测试剂及常规试剂，所述ZNF334基因的甲基化检测试剂对ZNF334基因在实体肿瘤中的甲基化水平进行检测，特异性甲基化引物对可以与ZNF334基因DNA甲基化位点序列特异性结合，灵敏、快速、准确地检测ZNF334的甲基化水平。利用本发明的试剂盒，可以在实体肿瘤的一种或多种本中检测ZNF334的甲基化状态，为实体肿瘤的诊断、风险预测、预后判断提供依据，效率高、成本低。

技术领域

本发明属于生物医学诊断技术领域，具体涉及一种基于ZNF334基因的检测试剂盒及应用。

背景技术

癌症是严重威胁人类生存和社会发展的重大疾病，是21世纪最严重的公共个卫生问题之一。我国居民的癌症发病率总体呈现上升趋势。在我国，最常见的肿瘤为肺癌、胃癌、肝癌、结肠癌和乳腺癌。

结肠癌是我国最常见的消化道恶性肿瘤之一，发病率和肿瘤相关死亡率在各类恶性肿瘤中均位居第三。早期发现，早期诊断，早期治疗是提高结肠癌治疗效果的最有效方法。由于结肠癌早期无特异性临床表现且缺乏高灵敏度和特异性的早期诊断技术，大部分患者确诊时已是癌症晚期，术后5年存活率极低(低于20％)。而乳腺癌是女性最常见的恶心肿瘤之一，近年来发病率逐年增高，但近30年来乳腺癌死亡率并未明显增加。这说明通过开展乳腺癌筛查及早诊早治工作，及治疗效果的提高，可以逐步降低乳腺癌对女性健康的威胁。

肿瘤早期诊断通常取决于两个关键因素：检查指标的高度特异敏感和检测方法的无创易行。粪便隐血检测和钡剂灌肠气钡双重造影是当前结肠癌筛查最为广泛的方法，但由于各自技术限制，特异性差、漏诊率高。电子结肠镜检查是结肠癌诊断的金标准，但属于侵入性操作，不适宜早期筛查。而现行结肠癌筛查应用的经典肿瘤标志物如CEA、CA199特异性及敏感性较差。常见的乳腺癌筛查方法包括：X线检查、超声检查等，但灵敏度和特异度均有待提高。因此，亟需寻找及开发出经济简便、高灵敏度特异度的分子标志物进行肿瘤癌的早期筛查和诊断。

近年来，DNA甲基化在结肠癌中的研究取得较大进展，为实体肿瘤的早期诊断、风险评估、预后判断和干预治疗提供了新的思路和靶点。以往的研究主要侧重于探索单个抑癌基因的甲基化状态与肿瘤癌临床病理学指标的相关性，以及其在实体肿瘤发生发展中的作用和机制，验证这些基因可否作为实体肿瘤早期诊断或预测预后的分子标志物。目前已经通过独立研究证实的具有较高甲基化频率的基因包括：APC、SEPT9、SFRP1/2、RASSF1A、MGMT和WIF1等。

随着分子生物学和分子检测技术的发展，使用一些高通量的甲基化检测方法可以实现同时检测多个甲基化位点，但不同的高通量方法检测的甲基化位点各不相同，结果的重复性较差。并且大多数研究只是检测肿瘤中基因的甲基化情况，缺少正常对照，无法评价其作为诊断指标的敏感性和特异性。

发明内容

本发明的目的是提供一种基于ZNF334基因的检测试剂盒及其在辅助诊断待测个体是否患有癌或预测待测个体是否具有患癌风险或判断待测个体的癌预后情况中的应用。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种基于ZNF334基因的检测试剂盒，所述检测试剂盒包含ZNF334基因的甲基化检测试剂及常规试剂；

所述常规试剂包括有聚合酶、PCR反应缓冲液、dNTPs、去离子水、DNA修饰试剂；

所述ZNF334基因的甲基化检测试剂包含用于检测ZNF334基因表达的特异性引物对、用于检测ZNF334基因启动子甲基化状态的特异性引物对、用于检测ZNF334基因启动子非甲基化状态的特异性引物对、用于提取样本DNA的提取试剂；

所述用于检测ZNF334基因表达的特异性引物对的序列如下：

上游引物序列为5’-GTCTCTGTGGGGTATCATGT-3’，如SEQ ID No.1所示；