[发明专利]一种质谱流式血液肿瘤免疫分型中替代侧向散射光信号的抗体组合及应用

说明书

本发明公开一种质谱流式血液肿瘤免疫分型中替代侧向散射光信号的抗体组合，为Lactoferrin抗体和Lysozyme抗体。本发明还公开一种质谱流式血液肿瘤免疫分型的圈门方法。本发明还公开一种质谱流式血液肿瘤免疫分型的试剂盒。本发明首次采用Lactoferrin抗体和Lysozyme抗体，并结合CD45抗体进行两级圈门策略，配合质谱流式细胞仪，能够取代传统流式CD45/SSC对于骨髓中成熟粒细胞，单核细胞，有核红细胞，淋巴细胞，原始及幼稚细胞，异常细胞亚群等各亚群的区分，突破了质谱流式在血液肿瘤细胞分析中无法检测SSC的技术难题，结合质谱流式多参数高通量特性，能够提高目前血液肿瘤的免疫分型深度。

技术领域

本发明涉及质谱流式细胞技术领域，具体涉及一种质谱流式血液肿瘤免疫分型中替代侧向散射光信号的抗体组合及应用。

背景技术

血液肿瘤的精准分型是正确选择治疗方案的前提，目前，国际上通用的是细胞形态学、免疫学、细胞遗传学和分子生物学分型，即MICM分型的方式。其中，免疫学分型的多参数流式细胞术扮演了重要的角色，该方法根据患者肿瘤细胞的免疫标识，提高了对具体的疾病类型鉴别的准确度。

多参数流式细胞术通过荧光抗体检测骨髓细胞表面的CD分子，如干/祖细胞抗原，骨髓细胞系相关抗原，红细胞、B细胞、T细胞、NK细胞、巨核细胞等相关抗原。常用的抗体组合通常是三色或者四色方案，使用三种或者四种荧光素分别标记抗体。流式分析血液肿瘤分型，通常会采用圈门的方式进行，即逐级对细胞亚群进行深入区分，比如在T细胞中，先用CD3区分T细胞，再用CD4和CD8区分CD3+CD4+T细胞和CD3+CD8+T细胞。流式细胞仪的侧向散射光(SSC)信号也发挥了很大的作用，目前对于流式检测结果的分析，第一级的圈门策略就是使用CD45和SSC分别作为横纵坐标，区分出CD45阴性的有核红细胞亚群，CD45dimSSC低的原始及幼稚细胞亚群，CD45dimSSC高的成熟粒细胞亚群，CD45+SSC低的淋巴细胞亚群，以及CD45+SSC中等水平的单核细胞亚群，再通过不同的抗体，对各个亚群进行深入分析。

为了完成血液肿瘤分型，往往需要检测30个以上的CD分子抗体以及一些其他的分型用抗体，由于目前临床常用的流式细胞仪是4-6色，也就是单次可以检测一个细胞上的4-6种蛋白质，完成30个以上抗体检测需要将一管骨髓分成8-10管样本分别染色和分析(其中一些抗体需要多次反复检测，用于确定细胞亚群)，样本用量大。流程繁琐，且无法对单个细胞进行30个蛋白以上参数的同步分析。多参数流式细胞术也常受到样本本底荧光的干扰，以及不同荧光素之间发射波长的重叠，即使使用了滤光片，也需要进行补偿调节。

质谱流式细胞技术是一种新型的多参数流式细胞术，使用如稀土金属元素等生物体内丰度极低的金属标记抗体，通过飞行时间质谱来精确检测每个细胞上的金属含量，由于质谱仪检测的特性，不同金属信号之间几乎不存在干扰，不需要调整补偿。只需要单管检测，就能够同时在单个细胞上检测43种抗体(包含CD分子)，对于复杂类型的细胞分型具有方法学上的优势，弥补了目前4-6色传统流式的不足，具备作为血液肿瘤免疫检测平台的潜力。

传统流式在检测血液肿瘤时，使用CD45和SSC进行圈门，能够快速区分出有核红细胞亚群，原始及幼稚细胞亚群，单核细胞亚群，淋巴细胞亚群，成熟粒细胞亚群等。由于质谱流式使用的是质谱方法学，细胞被完全离子化，因此在检测的过程中不包含传统流式的SSC，在应用到血液肿瘤时，无法进行类似流式的第一级圈门，即CD45和SSC联合圈门，无法区分各大细胞亚群，限制了质谱流式在血液肿瘤领域的临床应用和科学研究，有必要开发一种抗体组合，能够替代传统的SSC，可以很好地弥补质谱流式的这个不足，更好地发挥其多参数同步检测的优势，使质谱流式能够更好地应用于血液肿瘤的免疫表型检测。

发明内容

本发明的目的是提供一种质谱流式血液肿瘤免疫分型中替代侧向散射光信号的抗体组合及应用，以解决现有技术的不足。

本发明采用以下技术方案：