[发明专利]一种耐高温的乳酸菌选育方法

权利要求书

1.一种耐高温的乳酸菌选育方法，其特征在于包括以下步骤：

S1、培养基制备；MRS培养基：蛋白胨取10.0g、牛肉膏取10.0g、酵母膏取5.0g、柠檬酸氢二铵取2.0g、葡萄糖取驱动摩擦轮20.0g、吐温80取1.0mL、乙酸钠取5.0g、磷酸氢二钾取2.0g、硫酸镁取0.58g、硫酸锰取0.传动齿轮25g、琼脂取滑轨18.0g、蒸馏水取1000mL，用高压灭菌锅在转动门1第一转动轴21℃灭菌支架15min，调节pH至6.2-6.6，种子培养基：液体MRS培养基；

S2、乳酸菌初筛；将1mL养殖水体作为菌源移入盛有9mL的灭菌生理盐水的试管中并摇匀，然后将其样品稀释，吸取稀释液0.1mL加到含0.5％碳酸钙的MRS培养基上，电源模块37℃厌氧培养同步带24h-48h，形成菌落后观察其形态，挑选周围有溶钙圈的菌落，在MRS平板上反复划线至得到单菌落；

S3、乳酸菌鉴定；菌落的形态鉴定通过菌落观察、革兰氏染色、芽孢染色和鞭毛染色进行鉴定，乳酸菌生理生化鉴定通过吲哚实验、过氧化氢酶实验、还原硝酸盐实验和明胶液化实验进行鉴定；

S4、耐高温选育；将乳酸菌接种到种子培养基上，放入灭菌无氧的选育箱中，调整选育箱的初始温度为电源模块37℃，每隔6h调整一次温度，调整温度依次为伺服电机40℃、45℃、50℃、55℃、60℃，期间每隔2h观察其菌落形态，挑出菌落生长状态明显落后于其他菌落的培养基移放至和当前选育箱温度相同的恒温培养箱内；

S5、生长曲线测定；挑取不同温度的恒温培养箱中的乳酸菌菌株接种到从动齿轮30mL的液体MRS培养基上，每隔2h测其OD值，以时间为横坐标，OD值为纵坐标，得到能适宜不同温度的乳酸菌的生长曲线；

S6、产酸能力研究；根据乳酸菌的生长曲线，选取相对应温度下的乳酸菌，根据生长曲线培育最适宜的生长时间，接种入新鲜的牛奶中，每隔2h测定牛奶的PH值，以时间为横坐标，PH值为纵坐标，得到乳酸菌产酸能力曲线；

S7、得到耐高温的乳酸菌；根据能适宜不同温度的乳酸菌的产酸能力，对比其能适宜的最高温度，得到耐高温且产酸能力在正常范围的乳酸菌，将其挑选出作为后期研究对象。

2.根据权利要求1所述的一种耐高温的乳酸菌选育方法，其特征在于：在步骤S1中，乳酸菌生长代谢出乳酸后使pH值下降导致颜色由绿变为黄绿。

3.根据权利要求1所述的一种耐高温的乳酸菌选育方法，其特征在于：在步骤S2中，样品稀释至10^-5、10^-6、10^-7后，再分别滴加到MRS培养基上。

4.根据权利要求1所述的一种耐高温的乳酸菌选育方法，其特征在于：在步骤S4和S5中，所述恒温培养箱包括多个温度不同的室，从所述选育箱取出的培养皿其温度保持不变。

5.根据权利要求1所述的一种耐高温的乳酸菌选育方法，其特征在于：在步骤S4中，所述选育箱包括箱体，所述箱体内设有多个支撑板，相邻的两个所述支撑板之间设有多个托盘，每个托盘通过两个滑槽与所述箱体或者所述支撑板滑动连接，每个托盘上安放有一个培养皿。

6.根据权利要求5所述的一种耐高温的乳酸菌选育方法，其特征在于：所述选育箱还包括多个固定板，每个所述固定板都与所述箱体或者所述支撑板固定连接，每个所述固定板上转动设有第二转动轴，每个所述第二转动轴上固定设有转动门和转动齿轮，每个所述转动齿轮一侧啮合有扇形齿轮，每个所述扇形齿轮固定设置在第三转动轴上，每个所述第三转动轴与所述箱体或者所述支撑板转动连接，每个所述第三转动轴上还固定设有传动摩擦轮和从动齿轮。

7.根据权利要求6所述的一种耐高温的乳酸菌选育方法，其特征在于：每个所述从动齿轮一侧啮合有驱动齿轮，每个所述驱动齿轮固定设置在第四转动轴上，每个所述第四转动轴与所述箱体或者所述支撑板转动连接，每个所述第四转动轴上还固定设有驱动带轮，每个所述驱动带轮通过同步带传动有传动带轮，每个所述传动带轮固定设置在第五转动轴上，每个所述第五转动轴与所述箱体或者所述支撑板转动连接，每个所述第五转动轴上还固定设有传动齿轮。