[发明专利]一种诱导干细胞分化为心肌细胞的方法及其培养基组合

权利要求书

1.一种诱导干细胞分化为心肌细胞的方法，其特征在于，其包括以下步骤：采用第一分化培养基将干细胞诱导分化至中胚层；

使用第二分化培养基对所述中胚层进行诱导分化，所述第二分化培养基中添加有6～10mmol/L酸或在诱导分化的过程中添加酸使得酸在第二分化培养基中的终浓度为6～10mmol/L。

2.根据权利要求1所述的诱导干细胞分化为心肌细胞的方法，其特征在于，所述酸包括：盐酸和乳酸中的至少一种；

优选地，所述第二分化培养基的pH为6.2～6.9；

优选地，所述第二分化培养基由在基础分化培养基中添加所述酸配制获得；

优选地，所述第二分化培养基中还添加有WNT抑制剂，或在第二分化培养基诱导培养细胞的过程中添加WNT抑制剂；

优选地，所述WNT抑制剂为IWP-2、IWR-1和XAV939中的任意一种；

优选地，当WNT抑制剂为IWP-2时，所述WNT抑制剂在第二分化培养基中的终浓度为3～5μmol/L。

3.根据权利要求2所述的诱导干细胞分化为心肌细胞的方法，其特征在于，采用第二分化培养基对所述中胚层进行诱导分化的时长为5～7天；

优选地，当所述方法为在诱导分化的过程中添加酸使得酸在第二分化培养基中的终浓度为6～10mmol/L时，酸的添加时间为采用第二分化培养基对所述中胚层进行诱导分化的第1～6天；

当所述方法为在第二分化培养基诱导培养细胞的过程中添加WNT抑制剂时，WNT抑制剂的添加时间为采用第二分化培养基对所述中胚层进行诱导分化的第1～3天。

4.根据权利要求2所述的诱导干细胞分化为心肌细胞的方法，其特征在于，所述基础分化培养基的成分包括：DMEM/F12、L-抗坏血酸-2-磷酸镁、钠硒、转铁蛋白、化学成分明确的脂质浓缩液以及青链霉素中的至少一种；

优选地，所述基础分化培养基中，L-抗坏血酸-2-磷酸镁的终浓度为50～80mg/L，钠硒的终浓度为10～20μg/L，转铁蛋白的终浓度为1～20mg/L，青链霉素的终浓度为1～20U/mL。

5.根据权利要求1～4任一项所述的诱导干细胞分化为心肌细胞的方法，其特征在于，所述第一分化培养基包括：基础分化培养基以及添加有WNT通路激活剂的基础分化培养基，或，仅包括基础分化培养基；

当所述第一分化培养基包括基础分化培养基以及添加有WNT通路激活剂的基础分化培养基时，所述将干细胞诱导分化至中胚层的步骤包括：先采用添加有WNT通路激活剂的基础分化培养基培养干细胞1～2天，再更换为基础分化培养基对其进行培养，以获得所述中胚层；

当所述第一分化培养基仅包括基础分化培养基时，所述将干细胞诱导分化至中胚层的步骤包括：采用基础分化培养基培养干细胞1～2天过程中添加WNT通路激活剂，再更换为基础分化培养基对其进行培养，以获得所述中胚层；

优选地，所述WNT通路激活剂在基础分化培养基中的终浓度为1～10μmol/L；

优选地，所述WNT通路激活剂为GSK3β抑制剂；

优选地，所述GSK3β抑制剂为CHIR99021和/或CHIR99021 HCl。

6.根据权利要求1～4任一项所述的诱导干细胞分化为心肌细胞的方法，其特征在于，采用第二分化培养基对所述中胚层进行诱导分化后，采用第三分化培养基对细胞进行培养分化，所述第三分化培养基为不添加酸的基础分化培养基；

优选地，采用第三分化培养基对细胞进行培养分化的时长为2～4天。

7.根据权利要求1～4任一项所述的诱导干细胞分化为心肌细胞的方法，其特征在于，所述干细胞为多能干细胞。

8.根据权利要求7所述的诱导干细胞分化为心肌细胞的方法，其特征在于，所述多能干细胞选自人胚胎干细胞和人诱导多能干细胞中的至少一种。