[发明专利]一种延长茶树种质资源扦插枝条离体存活时间的方法

权利要求书

1.一种延长茶树种质资源扦插枝条离体存活时间的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)茶树种质资源收集：采集茶树种质资源，进行保鲜处理；

(2)制备外植体：将茶树枝条依次采用消毒溶液A、消毒溶液B和消毒溶液C进行浸泡消毒，得到所述外植体；

所述消毒溶液A为乙醇溶液；所述消毒溶液B为次氯酸钠和吐温的混合水溶液；所述消毒溶液C为聚乙烯吡咯烷酮、羧苄青霉素、硫酸链霉素的混合水溶液；

(3)不定芽诱导培养：将外植体接种于不定芽诱导培养基中，培养得到不定芽；

(4)种质保存培养：将不定芽接种至种质保存培养基上保存培养，每10个月继代一次；

步骤(1)中，所述保鲜处理具体包括：用吸水脱脂棉包裹枝条下端，然后喷洒保鲜剂；

所述保鲜剂，由以下质量份数的组分组成：蔗糖2份、1-甲基环丙烯0.5份、木质素1份、金银花提取物5份、胡萝卜汁4份、芦荟提取液4份、无水乙醇3份、硅藻土1份、水200份；

步骤(2)中，所述乙醇溶液的体积分数为70％；所述消毒溶液B中次氯酸钠的体积分数为1％，吐温的体积分数为0.1％；所述消毒溶液C中聚乙烯吡咯烷酮的浓度为50mg/L，羧苄青霉素的浓度为20mg/L，硫酸链霉素的浓度为20mg/L；

步骤(2)中，所述茶树枝条在消毒溶液A的浸泡时间为15s，在消毒溶液B中浸泡时间为1min，在消毒溶液C中浸泡时间为12min；

步骤(3)中，所述不定芽诱导培养基的配方为：以1/2MS培养基作为基本培养基，添加0.5mg/L6-BA+0.4mg/LNAA+0.1mg/L抗坏血酸+0.3g/L活性炭+12g/L甘露醇+1g/L玉米皮提取物；

所述玉米皮提取物的制备方法为：在500g玉米皮中加入4000mL水，在100℃下蒸煮2.5h，然后在50℃下烘干至水分含量为0.5wt％得到玉米皮干燥物，将玉米皮干燥物和体积分数为70％的乙醇以质量比1：10混和均匀后加热回流提取2h得到提取液，提取液旋转蒸发除去乙醇，得到玉米皮提取物；

步骤(3)中，所述培养的条件具体包括：在温度为24℃、光照强度为1500Lx、光照时间为12h/d的条件下，培养40d；

步骤(4)中，所述种质保存培养的配方为：以1/2MS培养基为基本培养基，添加0.2mg/L5-硝基愈创木酚钠+0.4mg/L青鲜素+0.2mg/L多效唑+0.3mg/L维生素C+4g芦苇提取物+1g柠檬精油；

步骤(4)中，所述保存培养的条件具体包括：在温度为14℃、光照强度为600Lx、光照时间为8h/d的条件下保存培养；

所述茶树种质资源为普洱野生大茶树。