[发明专利]一种用于检测HLA-A02基因的引物探针组、试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种用于检测HLA-A02基因的引物探针组，其特征在于，包括核苷酸如SEQ ID NO.1至 SEQ ID NO.6所示的HLA-A02特异性引物和HLA-A02特异性探针；其中，所述核苷酸如SEQID NO.1至 SEQ ID NO.6所示的引物探针组如下：

上游引物SEQ ID NO.1:5'-TCCTCGTCCCCAGGCACT-3'；

下游引物SEQ ID NO.2: 5'-GAACTGCGTGTCGTCCACG-3'；

上游引物SEQ ID NO.3: 5'-CGGGAACCTCCTGGACTACC-3'；

下游引物SEQ ID NO.4: 5'-CATGGCTGACGAGATCTGAGTG-3'；

探针SEQ ID NO.5: FAM-CCGCTTCATCGCAGTG-MGB；

探针SEQ ID NO.6: VIC-CAGCAGCACCACGGCGTTCACC-BHQ1。

2.根据权利要求1所述的引物探针组，其特征在于，所述引物探针组中含有HLA-A02基因和ABL1管家基因。

3.根据权利要求1所述的引物探针组，其特征在于，所述引物探针组中,荧光定量PCR探针的5’端有FAM或VIC修饰及荧光定量PCR探针的3’端有NFQ-MGB或BHQ1修饰。

4.一种试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括权利要求1至3任一所述用于检测HLA-A02基因的引物探针组。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阳性対照液和空白对照液；其中，所述阳性対照液中含有质粒DNA；所述空白对照为TE缓冲液；所述阳性対照液中加入有起保护质粒DNA作用的carrier RNA溶液，且所述carrier RNA溶液的终浓度为10~50ng/μL。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述质粒DNA中含有HLA-A02基因和ABL1管家基因。

7.一种检测HLA-A02基因方面的检测方法，用于非疾病诊断目的，包括如下步骤：

获取抽提的待测样本基因组DNA；

在同一荧光PCR扩增的反应体系中，将待测样本基因组DNA与核苷酸如SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.6所示的引物探针组的HLA-A02特异性引物和HLA-A02特异性探针按照确定比例进行混合；以所述待检测样本基因组DNA为模板，进行荧光PCR扩增，并收集荧光信号；

荧光信号收集结束后，导出数据结果并进行分析，判断所述检测样品基因组DNA中是否携带HLA-A02基因；

其中，所述核苷酸如SEQ ID NO.1至 SEQ ID NO.6所示的引物探针组如下：

上游引物SEQ ID NO.1:5'-TCCTCGTCCCCAGGCACT-3'；

下游引物SEQ ID NO.2: 5'-GAACTGCGTGTCGTCCACG-3'；

上游引物SEQ ID NO.3: 5'-CGGGAACCTCCTGGACTACC-3'；

下游引物SEQ ID NO.4: 5'-CATGGCTGACGAGATCTGAGTG-3'；

探针SEQ ID NO.5: FAM-CCGCTTCATCGCAGTG-MGB；

探针SEQ ID NO.6: VIC-CAGCAGCACCACGGCGTTCACC-BHQ1。

8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述待测样本基因组DNA中，稀释后DNA终浓度至1ng/μL~5ng/μL，所述荧光PCR扩增的反应体系中，还包括组分TaqMan FASTadvance Master Mix和超纯水。