[发明专利]用于检测自身免疫性脑炎的抗体组合物及其应用

说明书

本发明涉及一种用于检测自身免疫性脑炎的抗体组合物、试剂和试剂盒及制备方法，涉及免疫检测领域。该抗体组合物能够实现NMDAR、AMPA1、AMPA2、LGI1、CASPR2、GABA_BR六种抗体联合检测，大幅提高自身免疫性脑炎诊断的灵敏度和特异性，可用于自身免疫性脑炎的临床定性以及抗体滴度测定。

技术领域

本发明涉及免疫检测领域，特别是涉及一种用于检测自身免疫性脑炎的抗体组合物及其应用

背景技术

自身免疫性脑炎(autoimmune encephalitis,AE)是一组主要累及中枢神经系统的自身免疫性疾病。自身免疫性脑炎在儿童、青少年、成人均可发生。临床上，自身免疫性脑炎主要表现为急性或亚急性起病的以记忆力下降、癫痫发作、精神症状、运动障碍等症状为特征的脑炎综合征,病情严重者可出现癫痫持续状态、中枢性低通气等情况危及生命，有研究表明部分重症自免脑患者需住重症监护病房，病死率为4.0％-5.2％。因此早期诊断及治疗对自身免疫性脑炎至关重要。

自身免疫性脑炎通常包括两大类，典型的副肿瘤性边缘脑炎(limbicencephalitis，LE)，与抗神经元细胞内抗原的自身抗体(如Hu，Yo，Ma2等)相关；另一类是是与神经元表面或突触抗原自身抗体相关的新型自身免疫性脑炎，一般属于致病性抗体，这种自身抗体与其靶点结合导致不可逆性的神经元功能障碍。自2007年Dalmau等人发现抗N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)抗体以来，已鉴定出十多种新型自身抗体。这些自身抗体大多与特异性和特征性的症状有关，而这些自身抗体的检测证实了诊断。自2010年我国引进并建立抗NMDAR抗体诊断试验以来，已有数百例自身免疫性脑炎患者被诊断和治疗，改变了我国脑炎治疗的临床方法。

根据中国自免脑炎诊治专家共识，把新型的自免脑分为三个大组，把抗NMDAR脑炎单独分出来作为独立的一组，第二类是以精神行为异常,癫痫发作和近记忆力下降为主要临床表现的边缘性脑炎,可以合并或者不合并肿瘤，最常见的与这类边缘性脑炎相关的抗体有LGI1抗体，GABAb抗体以及AMPA抗体；第三类是其他一些特殊的临床综合征，包括与Caspr2抗体介导的Morvan综合征，多巴胺受体抗体介导的基底节脑炎，以及甘氨酸受体介导的PERM等。

然而，在中国，用于识别这类自身抗体资源十分有限，国内大多数实验室采用商业上可买到的基于细胞的检测方法(CBA，Euromimun，Germany)来诊断神经元细胞表面自身抗体，由于缺乏实验室资源，自身免疫性脑炎的及时诊断往往受到阻碍。

发明内容

针对上述问题，本发明提供一种用于检测自身免疫性脑炎的抗体组合物，能够实现NMDAR、AMPA1、AMPA2、LGI1、CASPR2、GABA_BR六种抗体联合检测，大幅提高自身免疫性脑炎诊断的灵敏度和特异性，可用于自身免疫性脑炎的临床定性以及抗体滴度测定。

为了达到上述目的，本发明提供了一种用于检测自身免疫性脑炎的抗体组合物，包括抗NMDAR、AMPA1、AMPA2、LGI1、CASPR2和GABA_BR的自身抗体。

本发明人在研究过程中发现，基于组织的检测(tissue-based assay，TBA)、基于细胞的检测(cell-based assay,CBA)以及基于活体海马或皮质神经元的间接免疫荧光法和免疫沉淀法可用于细胞内和细胞表面或突触抗体检测。在TBA中，患者血清或脑脊液中的抗体通过小鼠或大鼠脑切片的间接免疫荧光检测，是一种很好的筛选方法，但需要通过更具体的技术来证实。关于肿瘤神经抗体(如Hu、Ma2、Ri等)的检测，用重组蛋白对最常见的自身抗体进行商业免疫印迹是广泛可用的。另一方面，神经元表面自身抗体检测的金标准是CBA，在CBA中，表达适当抗原的细胞(例如人类胚胎肾293细胞)与患者的血清/脑脊液一起孵育，抗体通过间接免疫荧光来识别。这种方法具有高度敏感性和特异性，提高了抗体的检出率。