[发明专利]一种提高胎儿血红蛋白表达的方法

权利要求书

1.一种提高人造血干细胞胎儿血红蛋白(HbF)表达的方法，包括：

通过基因编辑技术破坏所述造血干细胞中2号染色体上从CTTCCT序列上游0-15个核苷酸至该CTTCCT序列下游0-15个核苷酸的BCL11A基因组区域，其中该BCL11A基因组区域位于chr2:60495236至chr2:60495271之间。

2.权利要求1所述的方法，其中所述BCL11A基因组区域序列为CTTCCT。

3.权利要求1或2所述的方法，其中所述基因编辑技术为基于锌指核酸酶的基因编辑技术、TALEN基因编辑技术或CRISPR/Cas基因编辑技术。

4.权利要求3所述的方法，其中所述基因编辑技术为CRISPR/Cas9基因编辑技术。

5.权利要求1-4任一权利要求所述的方法，包括向所述造血干细胞导入靶向所述BCL11A基因组区域的sgRNA以实现对所述BCL11A基因组区域的编辑。

6.权利要求3-5任一权利要求所述的方法，包括向所述造血干细胞导入包含选自SEQID NOs:3、4、8和33-63任一序列的sgRNA以实现对所述BCL11A基因组区域的编辑。

7.权利要求3-6任一权利要求的方法，将包含SEQ ID NO：4的序列的sgRNA导入所述造血干细胞以实现对所述BCL11A基因组区域的编辑。

8.权利要求5-7任一权利要求的方法，其中所述sgRNA是经过2’-O-甲基类似物和/或核苷酸间3’硫代修饰的。

9.权利要求8的方法，其中所述化学修饰为所述sgRNA的5’端前一个、二个和/或三个碱基和/或3’端的最后一个碱基的2’-O-甲基类似物修饰。

10.权利要求4-9任一权利要求的方法，其中将所述sgRNA与Cas9编码核苷酸共同导入所述造血干细胞。

11.权利要求10的方法，其中通过电转方法将sgRNA与Cas9编码核苷酸共同导入所述造血干细胞。

12.权利要求11的方法，其中所述电转条件为200-600V，0.5ms-2ms。

13.一种通过CRISPR/Cas9系统体外高效编辑造血干细胞的方法，包括将靶向从CTTCCT序列上游0-15个核苷酸至该CTTCCT序列下游0-15个核苷酸的BCL11A基因组区域的sgRNA导入造血干细胞，其中该BCL11A基因组区域位于chr2:60495236至chr2:60495271之间，其中该sgRNA是经过2’-O-甲基类似物和/或核苷酸间3’硫代修饰的。

14.权利要求13的方法，包括将含有选自SEQ ID NO：4、8和33-63任一序列的sgRNA导入造血干细胞，其中该sgRNA是经过2’-O-甲基类似物和/或核苷酸间3’硫代修饰的。

15.权利要求13或14的方法，其中将所述sgRNA与Cas9编码核苷酸共同导入所述造血干细胞。

16.权利要求15的方法，其中通过电转方法将sgRNA与Cas9编码核苷酸共同导入所述造血干细胞。

17.权利要求16的方法，其中所述电转条件为200-600V，0.5ms-2ms。

18.通过权利要求1～17中任一权利要求所述的方法得到的造血干细胞。