[发明专利]脂肪间充质干细胞联合纳米脂肪的比例混合物制备方法

权利要求书

1.脂肪间充质干细胞联合纳米脂肪的比例混合物制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

S1：分离提取脂肪间充质干细胞；

S2：培养脂肪间充质干细胞；

S3：对S2中培养的脂肪间充质干细胞进行筛选；

S4：制备纳米脂肪；

S5：混合纳米脂肪和筛选后的脂肪间充质干细胞，得到所需的比例混合物。

2.根据权利要求1所述的脂肪间充质干细胞联合纳米脂肪的比例混合物制备方法，其特征在于，所述S1包括：

S1.1：取新鲜的脂肪组织，经组织液冲洗，置于无菌培养皿中，剔除结缔组织和小血管；

S1.2：打碎上述剔除了结缔组织和小血管的脂肪组织，用磷酸缓冲液冲洗2-3次，去除红细胞；

S1.3：在上述去除了红细胞的脂肪组织中加入组织消化液，在37℃水浴内消化20-35分钟；

S1.4：将上述水浴消化后的组织悬浮液进行机械分离，经1000转/分钟离心5分钟，弃上清液；

S1.5：将弃掉上清液的沉淀用无菌磷酸缓冲液冲洗3次，得到脂肪间充质干细胞。

3.根据权利要求2所述的脂肪间充质干细胞联合纳米脂肪的比例混合物制备方法，其特征在于，所述S1.2中，选用眼科剪刀剪碎剔除结缔组织和小血管的脂肪组织。

4.根据权利要求2所述的脂肪间充质干细胞联合纳米脂肪的比例混合物制备方法，其特征在于，所述S1.3中，所述组织消化液为温和消化液，所述温和消化液为0.1％的I型胶原酶与0.25％胰蛋白酶按1:1组成。

5.根据权利要求4所述的脂肪间充质干细胞联合纳米脂肪的比例混合物制备方法，其特征在于，所述组织消化液与去除红细胞的脂肪组织的体积比为3-5:1。

6.根据权利要求1所述的脂肪间充质干细胞联合纳米脂肪的比例混合物制备方法，其特征在于，所述S2中脂肪间充质干细胞在含血清的DMEM培养基中进行培养，观察到贴壁细胞后，更换培养液。

7.根据权利要求6所述的脂肪间充质干细胞联合纳米脂肪的比例混合物制备方法，其特征在于，所述DMEM培养基为高糖型DMEM培养基。

8.根据权利要求1述的脂肪间充质干细胞联合纳米脂肪的比例混合物制备方法，其特征在于，所述S3中，选取P3代细胞经流式细胞术鉴定脂肪间充质干细胞表面抗原。

9.根据权利要求1所述的脂肪间充质干细胞联合纳米脂肪的比例混合物制备方法，其特征在于，所述S4包括如下步骤：

S4.1：取脂肪组织，经组织液冲洗，置于无菌培养皿中，剔除结缔组织和小血管；

S4.2：用无菌注射器搭配孔径为1毫米的纳米脂肪转换器制备适量新鲜纳米脂肪。