[发明专利]微量核酸真空离心浓缩装置与微量核酸溶液浓缩方法

说明书

本发明提供一种微量核酸真空离心浓缩装置与微量核酸溶液浓缩方法，微量核酸真空离心浓缩装置包括真空锅、气溶胶吸附件、离心机构及抽真空机构；真空锅的壳壁上设有抽气孔，抽气孔与抽真空机构连通，抽真空机构用于对真空锅的内部环境进行抽真空处理；离心机构包括离心转子，离心转子可转动地设于真空锅内，离心转子上用于安装微量离心试管，以对微量离心试管内的微量核酸样本进行离心；气溶胶吸附件设于抽气孔中，气溶胶吸附件用于吸附真空锅的内部环境中的核酸气溶胶。本发明在防止微量核酸样本过渡离心丢失，防止核酸样本间气溶胶交叉污染的情形下，保留核酸的理化特性，获得符合人体和石蜡样本基因文库质量标准的高浓度的微量核酸溶液样本。

技术领域

本发明涉及核酸提取技术领域，尤其涉及一种微量核酸真空离心浓缩装置与微量核酸溶液浓缩方法。

背景技术

在核酸提取领域，合格提取的新鲜生物核酸样本在加入体系反应量为1～3ul时，应达到20ng/ul，以用于下游的PCR反应。石蜡组织样本有很多核酸断裂短碎片，为提取质量核酸的困难检材样本，对循环肿瘤细胞、培养细胞、脱落细胞、穿刺细胞、长期保存的石蜡组织等微量检材提取的浓度在1～5ng/ul以下的样本称之为微量核酸样本，提取浓度达到0.1ng/ul的样本称之为痕量核酸样本。不久前微量或痕量核酸样本一般在法医学而不在医疗实验室临床应用，在后续PCR反应、测序等实验反应中认为不能利用微量核酸样本完成稳定的实验反应。因此，对医学上采用穿刺或微创等新技术检查病人的微少样本，在进行常规基因应用检查上基本被放弃利用,但是，随着微创新技术在医疗上的逐渐推广，约有50％的肿瘤非手术病例得不到常量检材样本，所产生的微量核酸无法在精准医疗的新技术中应用获益。

随着近年来医学基因组临床功用逐步深入到肿瘤石蜡陈旧样本(含石蜡HE染色片)、微创手术小样本、穿刺取材小样本、液体活检样本、遗传生殖培养细胞、呼吸腔道粘膜细胞样本及污染环境的体液排泄物可疑感染类病原体基因检测样本，这些小标本核酸获取量常常在1-5ng/ul以下，有很多病例的病种需要针对微量核酸，甚至痕量核酸的富集和浓缩。

真空浓缩技术是随着现代生物食品、农林和药物工程的生产需求而发展起来的，采用的仪器为真空离心浓缩仪。真空离心浓缩仪主要包括离心机、真空泵及加持蒸发设备，真空浓缩仪通过抽真空降低液体沸点来提高蒸发，在浓缩过程中，液体疏松容积扩张，使得液体密度降低，蒸发流动速度加快。

然而，现有的真空浓缩仪主要适用于蛋白产品、多糖产品、肽类制品等多种样本的浓缩富集，其主要用于将液体样本离心浓缩到200ul以上，或冷冻到干燥粉末，很少应用于微量核酸样本的离心浓缩到额定液态，不能满足全基因组文库需要的加样7ul-10ul以下液体文库模板制备所需要的60ng核酸量(60ng/7-10ul)的需求，也达不到NGS,Sager测序、微卫星多重PCR及qPCR等要求达到的在1-2ul加样量中含有5ng以上微量核酸的质控标准。

在实际应用中，即使采用真空浓缩仪离心获得10ul以下的微量液体，但是，为了加快液体蒸发速度，当前在真空浓缩中通常设置蒸发温度在60℃以上，并添加酸碱有机溶剂，这种浓缩方式会导致微量核酸各种长片段也被蒸发、冻融或加热，对核酸的理化特性造成严重的破坏。与此同时，在加热蒸发浓缩过程中，核酸样本存在气溶胶交叉污染的风险，难以确保检测结果的准确性。

发明内容

本发明提供一种微量核酸真空离心浓缩装置与微量核酸溶液浓缩方法，用以解决或改善现有技术存在的至少一种技术问题，以实现在一定程度上消除浓缩过程中核酸样本间的交叉污染风险，获得高浓度的核酸溶液。