[发明专利]一种与三疣梭子蟹卵巢发育相关的miRNA类似物及其应用

说明书

本发明属于水产养殖生物技术领域，公开了一种与三疣梭子蟹卵巢发育相关的miRNA类似物及其应用。所述miRNA类似物为let‑7‑5p、miR‑141‑3p中的一种或者多种。本发明在合成let‑7‑5p agomir和miR‑141 agomir后，将两者同时通过第三步足基部注射到三疣梭子蟹雌蟹体内，即可通过下调甲基法尼酯分解途径关键酶基因JHE‑like CXE‑1和JHE‑like CXE‑2表达以及上调卵黄蛋白原基因vtg表达，实现促进三疣梭子蟹外源性卵黄合成，加快三疣梭子蟹卵巢发育成熟的目的，并且本发明的方法及制备的促进剂对亲体造成的副作用小，高效、可靠，适用于大量亲体促熟。

技术领域

本发明属于水产养殖生物技术领域，具体涉及一种与三疣梭子蟹卵巢发育相关的miRNA类似物及其应用。

背景技术

三疣梭子蟹（Portunus trituberculatus）属于甲壳纲（Crustacea）、十足目（Decapoda）、梭子蟹科（Portunidae）、梭子蟹属（Portunus），是我国重要的海水养殖种类。近些年，梭子蟹养殖产业发展迅速。然而，由于产业缺乏有效的生殖调控技术，高质量苗种的产量无法满足需求，严重限制了养殖产业的发展。因此，建立高效的生殖调控技术对于三疣梭子蟹养殖产业可持续发展具有重要意义。

目前，切除眼柄是生产中常用的刺激甲壳类卵巢成熟的方法，但是切除眼柄会损伤亲体，且会造成卵质量下降、孵化率降低等问题。microRNA（以下简称miRNA）一类非编码RNA，能够与靶基因的3′UTR特异性结合，对靶基因表达进行负调控，在动物生殖调控中具有重要作用。通过注射人工合成的miRNA类似物，可以模拟内源miRNA对其靶基因的调控作用，实现对卵巢发育过程的控制。

发明内容

本发明的目的在于提供一种与三疣梭子蟹卵巢发育相关的miRNA类似物及其应用。所述miRNA类似物包括let-7-5p和miR-141-3p，两者对甲基法尼酯（MF）分解途径关键酶具有很好的抑制靶向作用，进而促进三疣梭子蟹卵巢成熟发育。

为实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案予以实现：

本发明提供了一种与三疣梭子蟹卵巢发育相关的miRNA类似物，所述miRNA类似物为let-7-5p、miR-141-3p中的一种或者多种。

本发明还提供了所述的miRNA类似物在制备三疣梭子蟹卵巢发育促进剂中的应用。

进一步的，所述卵巢发育促进剂中同时包含let-7-5p agomir和miR-141 agomir。

进一步的，所述let-7-5p agomir的正义链序列为：AACUAUACAACCUACUACCUCAGG，反义链序列为：UGAGGUAGUAGGUUGUAUAGUUUU。

进一步的，所述miR-141 agomir的正义链序列为：UAACACUGUCUGGUAAAGAUGGGG，反义链序列为：CCAUCUUUACCAGACAGUGUUAUU。

进一步的，所述卵巢发育促进剂的制备和使用方法为：合成let-7-5p agomir和miR-141 agomir后，将两者进行混合，制成三疣梭子蟹卵巢发育促进剂，直接将卵巢发育促进剂通过第三步足基部注射到三疣梭子蟹雌蟹体内即可。

进一步的，所述miRNA类似物通过下调JHE-like CXE-1和JHE-like CXE-2基因表达以及上调vtg基因表达，以达到加快三疣梭子蟹卵巢发育成熟的作用。