[发明专利]一种双相体系下化学酶法级联催化腈类化合物的一锅法合成工艺

权利要求书

1.一种双相体系下化学酶法级联催化腈类化合物的一锅法合成工艺，其特征在于包括如下：在双相体系中，以醛类化合物为底物，在室温下与盐酸羟胺和无水碳酸钠反应反应一段时间后生成醛肟，然后直接加入含有醛肟脱水酶的重组大肠杆菌磷酸缓冲液，通过脱水反应制得目标产物；其中双相体系包括有机相和水相。

2.如权利要求1所述的工艺，其特征在于，所述双相体系的有机相为正己烷相，其有机相与水相体积比为1:1～2:1。

3.如权利要求1所述的工艺，其特征在于，所述双相体系的有机相为正己烷相，其有机相与水相体积比为1:1。

4.如权利要求1所述的工艺，其特征在于，所述醛类化合物为苯甲醛、苯乙醛，2-溴苯甲醛、3-溴苯甲醛、4-溴苯甲醛、2-氟苯甲醛、对甲氧基苯甲醛、呋喃-2-醛、3-甲基噻吩-2-醛、丁醛、己醛、庚醛、2,6-二甲基庚-5-烯醛中的一种。

5.如权利要求1所述的工艺，其特征在于，所述的醛类化合物、盐酸羟胺、无水碳酸钠的投料摩尔比为(1:1.2:0.75)～(1:1.5:0.8)。

6.如权利要求1所述的工艺，其特征在于醛类化合物与盐酸羟胺和无水碳酸钠的反应时间为1～3h。

7.如权利要求1所述的工艺，其特征在于加入含有醛肟脱水酶的大肠杆菌后反应时间为1～3h。

8.如权利要求1所述的工艺，其特征在于含有醛肟脱水酶的重组大肠杆菌的制备具体是将大肠杆菌接种于含抗生素的TB培养基中，培养至OD₆₀₀值达到0.6～0.8，培养温度调节至18℃，200rpm条件下继续培养12h，离心，收集菌体获得所述有醛肟脱水酶的大肠杆菌。

9.如权利要求1所述的工艺，其特征在于含有醛肟脱水酶的大肠杆菌磷酸缓冲液中的溶剂为pH＝7.0～8.0,50mM的磷酸钾缓冲液。

10.如权利要求1或9所述的工艺，其特征在于含醛肟脱水酶的大肠杆菌的用量以静息细胞重量计为20～30mg/mL。