[发明专利]一株在低糖环境下生产透明质酸的马链球菌兽疫亚种及其应用

权利要求书

1.一株马链球菌兽疫亚种(Streptococcus equi subsp.zooepidemicus)WTF101，于2022年1月10日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址：湖北省武汉市武昌区八一路299号，保藏编号为CCTCC NO：M 2022051。

2.如权利要求1所述的马链球菌兽疫亚种WTF101，其特征在于，所述马链球菌兽疫亚种WTF101的16s rRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

3.权利要求1所述的马链球菌兽疫亚种WTF101在低糖环境下生产透明质酸中的应用。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述低糖环境下生产透明质酸是指在低糖发酵培养基中生产透明质酸，所述低糖发酵培养基的组分为：3-5％葡萄糖、1-2％蛋白胨、0.5-1.0％酵母浸粉、0.1-0.5％三水磷酸氢二钾、0.05-0.2％七水硫酸镁，并在发酵过程中补加葡萄糖，保证葡萄糖浓度维持在1.0-2.6％之间，最终发酵培养基的葡萄糖总浓度为7.2-8.0％。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述低糖发酵培养基的组分为：4％葡萄糖、1.5％蛋白胨、0.6％酵母浸粉、0.2％三水磷酸氢二钾、0.05％七水硫酸镁，并在发酵过程中补加葡萄糖，保证葡萄糖浓度维持在1.0-2.6％之间，最终发酵培养基的葡萄糖总浓度为7.2％。

6.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述生产透明质酸的产量为9.5-12.2g/L，发酵液的粘度为52500-74000mPa·s，原料与产物之间的转化效率为13.2-16.9％，发酵周期为16-20h。

7.一种利用权利要求1所述的马链球菌兽疫亚种WTF101生产透明质酸的方法，其特征在于，包括步骤：

(1)种子活化：将马链球菌兽疫亚种WTF101接种至种子培养基中，150-220rpm、36-37℃活化至OD₆₀₀为1.0-1.5，得一级种子液；

(2)种子扩培：将步骤(1)得到的一级种子液按照1-5％体积百分比接种量接种至种子培养基中，150-220rpm、36-37℃培养至OD₆₀₀为1.0-1.5，得二级种子液；

(3)发酵：将步骤(2)得到的二级种子液接种至发酵培养基中，接种量为5-10％体积百分比，设定发酵温度36-37℃，pH＝7.0，转速200-500rpm，通风比1:1，溶氧大于30％，维持并执行以上发酵条件，待发酵液中残糖低于2g/L时即可结束发酵，放罐提纯；

(4)提纯：将步骤(3)得到的发酵液经提取、纯化、精制后得透明质酸成品。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤(1)和步骤(2)中所述种子培养基的组分为：0.5％葡萄糖、1％蛋白胨、0.4％酵母浸粉、0.2％三水磷酸氢二钾、0.05％七水硫酸镁、pH＝7.0。

9.如权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤(3)中所述发酵培养基的组分为：3-5％葡萄糖、1-2％蛋白胨、0.5-1.0％酵母浸粉、0.1-0.5％三水磷酸氢二钾、0.05-0.2％七水硫酸镁，并在发酵过程中补加葡萄糖，保证葡萄糖浓度维持在1.0-2.6％之间，最终发酵培养基的葡萄糖总浓度为7.2-8.0％。

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，步骤(3)中所述发酵培养基的组分为：4％葡萄糖、1.5％蛋白胨、0.6％酵母浸粉、0.2％三水磷酸氢二钾、0.05％七水硫酸镁，并在发酵过程中补加葡萄糖，保证葡萄糖浓度维持在1.0-2.6％之间，最终发酵培养基的葡萄糖总浓度为7.2％。