[发明专利]一种黏膜黑色素瘤3D类器官及其培养方法和应用

权利要求书

1.一种培养黏膜黑色素瘤3D类器官的培养基，其特征在于，所述培养基包括：基础培养基，以及以基础培养基为基准的以下成分：HEPES缓冲液、GlutaMAX、Primocin、B27补充剂、N-Acetylcysteine、rhEGF、A83-01、Nicotinamide、Wnt3a、Noggin以及R-spondin-1。

2.一种培养黏膜黑色素瘤3D类器官的培养基，其特征在于，所述培养基包括：基础培养基，以及以基础培养基为基准的以下成分：2-20mM HEPES缓冲液、1-5mM GlutaMAX、0.2-2mg/ml Primocin、0.5-5v％B27补充剂、0.75-2mM N-Acetylcysteine、20-100ng/mlrhEGF、0.05-0.3μM A83-01、2-20mM Nicotinamide、300-800ng/ml Wnt3a、0.05-0.3μg/mlNoggin、0.05-0.3μg/ml R-spondin-1。

3.如权利要求2所述的培养基，其特征在于，所述培养基包括：Advanced DMEM/F12培养基，以及以Advanced DMEM/F12培养基为基准的以下成分：10mM HEPES缓冲液、2mMGlutaMAX、1mg/ml Primocin、2v％B27补充剂、1mM N-Acetylcysteine、50ng/ml rhEGF、0.1μM A83-01、10mM Nicotinamide、500ng/ml Wnt3a、0.1μg/ml Noggin以及0.1μg/ml R-spondin-1。

4.如权利要求1所述的培养基，其特征在于，包括以下至少一项：

1)所述基础培养基选自Advanced DMEM/F12培养基、DMEM、高糖DMEM培养基、αMEM培养基和RPMI1640培养基中的至少一种；

2)所述培养基还包括胎牛血清；优选地，所述培养基还进一步包括Y-27632、FGF-10、Dexamethasone、N2、FGF-2、Prostaglandin E2、CHIR 99021、Forskolin、Antibiotic-Antimycotic、烟酰胺、地塞米松中的至少一种；更优选地，所述培养基还包括胎牛血清、Y-27632、FGF-10、Dexamethasone、N2、FGF-2、Prostaglandin E2、CHIR 99021、Forskolin和Antibiotic-Antimycotic。

5.如权利要求4所述的培养基，其特征在于，包括以下至少一项：

1)所述胎牛血清在Advanced DMEM/F12中的浓度为0.5-5v％；

2)所述Y-27632在Advanced DMEM/F12中的浓度为2-20μM；

3)所述FGF-10在Advanced DMEM/F12中的浓度为50-300ng/ml；

4)所述Dexamethasone在Advanced DMEM/F12中的浓度为0.75-2μM；

5)所述N2在Advanced DMEM/F12中的浓度为0.5-3v％；

6)所述FGF-2在Advanced DMEM/F12中的浓度为3-12ng/ml；

7)所述Prostaglandin E2在Advanced DMEM/F12中的浓度为0.5-3μM；

8)所述CHIR 99021在Advanced DMEM/F12中的浓度为0.1-0.3μM；

9)所述Forskolin在Advanced DMEM/F12中的浓度为0.5-3μM；

10)所述Antibiotic-Antimycotic在Advanced DMEM/F12中的浓度为0.5-3v％；

11)所述烟酰胺在Advanced DMEM/F12中的浓度为5-30mmol/L；

12)所述地塞米松在Advanced DMEM/F12中的浓度为0.2-2μmol/L。

6.如权利要求1～5任一项所述的培养基在培养黏膜黑色素瘤3D类器官中的应用。