[发明专利]一种唾液腺腺样囊性癌类器官及其培养方法、培养基和应用

说明书

本发明属于生物医药领域，公开了一种唾液腺腺样囊性癌类器官及其培养方法、培养基和应用。本发明针对唾液腺腺样囊性癌细胞的生长特点，通过含多种组分培养基所发挥的协同作用，能有效地短期内在体外形成类器官。本发明所述培养基及方法适用于唾液腺腺样囊性癌类器官的培养，培养获得的类器官对于研究该肿瘤发生、独特侵袭性生长机制、预后、治疗靶点及药物筛选等具有重要意义，具有广泛应用前景。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，涉及一种唾液腺腺样囊性癌类器官及其培养方法、培养基和应用。

背景技术

唾液腺腺样囊性癌(salivary adenoid cysticcar cinoma，SACC)是一种常见唾液腺上皮源性恶性肿瘤，分别约占所有唾液腺肿瘤和唾液腺恶性肿瘤的10％和28％，是最常见的唾液腺恶性肿瘤之一，好发于腮腺及腭，其次为下颌下腺。嗜神经生长是唾液腺腺样囊性癌独特生物学特征，患者早期即可出现面瘫、麻木等神经症状，易发生肺转移；但肿瘤生长缓慢，患者总病程较长，5年生存率尚可，但长期生存状况不佳，10年生存率明显降低。手术切除和术后辅助放化疗是目前临床治疗唾液腺腺样囊性癌的首选方法，尚无有效化疗药物。

以往唾液腺腺样囊性癌的体外研究多采用平面培养体系，细胞或组织多不能反应肿瘤真实组织形态、细胞功能，丧失肿瘤异质性，是导致药物开发及肿瘤发生、发展机制研究进展缓慢的主要因素之一。类器官是近年来兴起、模拟体内培养条件的体外研究模型，培育出的组织不仅保留原肿瘤的遗传学特征、细胞组织形态，且类器官细胞具异质性，是研究肿瘤异质性、发生发展机制的优秀体外模型，在药物研发、个体化精准治疗中具广阔应用前景，目前对唾液腺腺样囊性癌类器官建立方法较少。本发明关于唾液腺腺样囊性癌类器官模型建立方法将有利于推动腺样囊性癌组织发生、浸润生长机制、药物研发、个体化治疗等研究迈上新高度。

发明内容

鉴于以上所述唾液腺腺样囊性癌培养技术现状，本发明目的在于提供一种唾液腺腺样囊性癌类器官及其培养方法和应用，用于解决现有技术中唾液腺腺样囊性癌类器官培养基及培养方法等问题，实现培养获得组织细胞形态、蛋白表达等与真实唾液腺腺样囊性癌高度一致的3D类器官目的。

为实现上述目的及其它相关目的，本发明提供一种唾液腺腺样囊性癌类器官及其培养方法和应用。

本发明提供了一种培养唾液腺腺样囊性癌类器官的培养基，所述培养基包括：

Advanced DMEM/F12，以及以Advanced DMEM/F12为基准的以下成分：0.5～2v％青霉素-链霉素双抗、0.5～2v％GlutaMAX、0.5～2v％HEPES缓冲液，50～300ng/ml成纤维生长因子(FGF-10)、10～200ng/ml EGF、0.01～1μmol/l TGF-βI型受体抑制剂、300～800ng/mlWnt3a重组蛋白、0.05～0.3μg/ml Noggin重组蛋白、0.05～0.3μg/ml R-spondin-1重组蛋白、0.2～2.5mmol/L N-乙酰半胱氨酸(N-Acetylcysteine,NAC)，5～30mmol/L烟酰胺(Nicotinamide)，0.5～5v％B27补充剂，0.2～5μmol/L地塞米松，5～30μmol/l Y-27632(Rock抑制剂)，0.5～3v％N-2补充剂。

其中，v％是指某物质占Advanced DMEM/F12的体积百分比。例如0.5～2v％青霉素-链霉素双抗是指在100mL Advanced DMEM/F12中，青霉素-链霉素双抗的体积为0.5～2mL。

其中，青霉素-链霉素双抗占Advanced DMEM/F12的体积百分数为0.5～2％，可以是0.5～1.0％、0.5～1.0％、1.0～1.5％、1.5～2％，具体可以是0.5、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、1.8、2.0％。优选地，为0.6～1.6％；进一步优选地，为0.8～1.2％；更进一步优选地，为1％。