[发明专利]组织工程化传导束传导速度的调控方法及应用

权利要求书

1.一种组织工程化传导束传导速度的调控方法，其特征在于，包括如下步骤：

将Tbx3过表达的Tbx3⁺H9C2重组细胞与Tbx3^-H9C2重组细胞按特定比例配比，种植到支架上构建ECT，种植密度范围为1×10⁷cells/ml～1.1×10⁷cells/ml，培养周期为1周，构建得到传导速度接近在体房室交界水平的ECT。

2.根据权利要求1所述的组织工程化传导束传导速度的调控方法，其特征在于：

其中，Tbx3⁺H9C2重组细胞与Tbx3^-H9C2重组细胞按照70-80％:20-30％比例进行配比后种植。

3.根据权利要求1所述的组织工程化传导束传导速度的调控方法，其特征在于：

其中，所述支架为胶原海绵支架，尺寸为10mm*3mm*3mm，用前Co⁶⁰照射12小时以上消毒备用。

4.根据权利要求1所述的组织工程化传导束传导速度的调控方法，其特征在于：

其中，Tbx3过表达的H9C2重组细胞的构建方法如下：

扩增Tbx3 cDNA后将其插入到pLenti-EF1-EGFP-P2A-Puro-CMV-3Flag-WPRE中得到pLenti-EF1-EGFP-P2A-Puro-CMV-TBX3-3Flag-WPRE重组载体系统；进一步将该重组载体系统与pHelper1.0、pHelper2.0共转染293T细胞，并确定慢病毒滴度；利用上述完成的慢病毒稳定转染体系转染细胞，建立过表达Tbx3的H9C2重组细胞。

5.根据权利要求1所述的组织工程化传导束传导速度的调控方法，其特征在于：

其中，种植前，Tbx3过表达重组细胞的处理过程如下：加0.25％胰酶于37℃、5％CO₂培养箱中消化1-2分钟，倒置相差显微镜下观察，细胞胞体回缩呈圆形，加含10％FBS的DMEM/F12培养基终止消化，用玻璃滴管吹打成单细胞悬液，1200转低速离心5分钟，弃去上清液，加入含血清的培养液，用玻璃滴管吹打成单细胞悬液，调整细胞密度为1～1.1×10⁷个/ml，置4℃冰箱保存备用。

6.根据权利要求1所述的组织工程化传导束传导速度的调控方法，其特征在于：

其中，Tbx3过表达重组细胞的种植方法如下：将Tbx3过表达的Tbx3⁺H9C2重组细胞与Tbx3^-H9C2重组细胞按比例配比后，配制成相应种植密度的细胞悬液；使用200μL移液枪将150μL上述细胞悬液缓慢滴加至支架上，待细胞悬液慢慢渗入，放入37℃恒温培养箱中培养4小时。

7.根据权利要求1所述的组织工程化传导束传导速度的调控方法，其特征在于：

其中，ECT的体外培养方法如下：向多孔培养板中滴加一定量的细胞悬液，将构建得到的ECT置于细胞悬液中，待支架海绵将细胞悬液吸收后再向海绵表面滴加等量细胞悬液，置于37℃、含5％CO₂的培养箱中孵育1小时，再向培养孔中加入新鲜含10％胎牛血清的培养液，继续置于37℃、含5％CO₂的培养箱中培养2周，每2天换一次液，

该含10％胎牛血清的培养液组分如下：10％FBS、89％DMEM/F12培养基、1％青链霉抗生素。

8.根据权利要求1～7任一项所述的调控方法构建得到的组织工程化传导束。