[发明专利]一种近红外光动力联动检测硝基还原酶与过氧化氢的荧光分子探针及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种近红外光动力联动检测硝基还原酶与过氧化氢的荧光分子探针，其特征在于，所述探针的结构式如式1所示：

2.权利要求1所述的近红外光动力联动检测硝基还原酶与过氧化氢的荧光分子探针的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)化合物7的合成：将4-(4-羟基苯基)环己酮、对硝基苄溴与碳酸盐溶解后加热回流；将得到的固体粗产物洗涤后干燥，将得到的固体进行重结晶，即得化合物7如下所示；

(2)化合物8的合成：将三氯氧磷溶于二氯甲烷后滴入除水除氧后的DMF与CH₂Cl₂的混合液中，在冷肼条件下反应，完成后加入所述化合物7，待混合液恢复室温后进行加热回流，完成后萃取得到的反应液中的目标产物，即得化合物8如下所示；

(3)化合物9的合成：将所述化合物8与化合物3溶于溶剂中，所述化合物3的结构式如下所示；然后在黑暗环境下加热回流后冷却，将得到的固体产物进行干燥，即得化合物9如下所示；

(4)化合物10的合成：将所述化合物9与醋酸盐溶于除氧溶剂中，然后在黑暗环境和保护气氛中进行加热反应，从得到的液相中提取目标产物、纯化，即得化合物10如下所示；

(5)近红外荧光分子探针的合成：将所述化合物10与碳酸铯溶解后在黑暗环境和保护气氛中进行加热反应，然后加入对-苄溴苯硼酸的四氢呋喃溶液再次加热反应，完成后分离出反应液中的目标产物，纯化，即得所述近红外荧光分子探针，全程避光操作。

3.根据权利要求2所述的近红外光动力联动检测硝基还原酶与过氧化氢的荧光分子探针的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，将所述4-(4-羟基苯基)环己酮、对硝基苄溴、碳酸盐溶于除氧的丙酮中后加热回流；可选地，所述4-(4-羟基苯基)环己酮、对硝基苄溴、碳酸盐的摩尔比为1:1:1～1:3:6；优选地，所述碳酸盐包括碳酸钠、碳酸钾中的至少一种。

4.根据权利要求2所述的近红外光动力联动检测硝基还原酶与过氧化氢的荧光分子探针的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，将所述固体粗产物用乙酸乙酯/二氯甲烷的混合液洗涤，然后将减压浓缩得黄色固体，将其用石油醚重结晶后减压蒸馏，得到黄色固体，即得目标化合物7；优选地，步骤(1)中，所述加热回流的温度为55～65℃，反应时间为16～20小时。

5.根据权利要求2所述的近红外光动力联动检测硝基还原酶与过氧化氢的荧光分子探针的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，将所述除水除氧后的DMF与CH₂Cl₂混合后于不高于-10℃的冷阱中搅拌；并将三氯氧磷溶于二氯甲烷形成溶液缓慢滴入所述DMF与CH₂Cl₂的混合液中继续搅拌，滴加完毕后加入所述化合物7，待恢复至室温后加热回流；

优选地，步骤(2)中，所述化合物7和三氯氧磷的摩尔比为1:1～1:5。

6.根据权利要求2所述的近红外光动力联动检测硝基还原酶与过氧化氢的荧光分子探针的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，回流结束后，将得到的反应液冷却后用二氯甲烷/乙酸乙酯混合液进行萃取，经无水硫酸钠干燥后减压蒸馏后得黄色固体，即为目标化合物8；优选地，步骤(2)中，所述加热回流的温度为40～55℃，反应时间为2～5小时。

7.根据权利要求2所述的近红外光动力联动检测硝基还原酶与过氧化氢的荧光分子探针的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，将所述化合物8与化合物3溶于甲苯/正丁醇混合溶液；优选地，所述化合物8与化合物3的摩尔比为1:1～1:4；

优选地，步骤(3)中，所述加热回流的温度为110～130℃，反应时间为2～3.5小时；

优选地，步骤(3)中，将回流反应得到的混合液急速冷却，得绿色固体粗产物，然后将该固体粗产物于真空干燥箱内干燥，即得目标化合物9。