[发明专利]一种日本鳗鲡芳香化酶cyp19a1基因启动子及其应用

说明书

本发明涉及一种日本鳗鲡芳香化酶cyp19a1基因启动子及其应用。本发明成功克隆了日本鳗鲡芳香化酶cyp19a1基因启动子序列，并成功构建了日本鳗鲡芳香化酶cyp19a1基因启动子pGL3‑cyp19a1IP4荧光素酶报告质粒。实验证明日本鳗鲡芳香化酶cyp19a1基因启动子有明显的启动子活性。日本鳗鲡芳香化酶cyp19a1基因启动子的克隆及其强启动子活性的诱导表达分析，为研究日本鳗鲡芳香化酶cyp19a1基因的表达调控及细胞信号转导调控网络提供良好的试验系统，可用于促进性腺发育成熟的药物筛选。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，尤其涉及一种日本鳗鲡芳香化酶cyp19a1基因启动子及其应用。

背景技术

芳香化酶通过催化C19雄激素生物合成C18雌激素，促使肝脏合成卵黄蛋白原，保证了卵母细胞的卵黄生成和积累，使得卵母细胞的发育能够正常地进行。芳香化酶由cyp19a1基因编码，主要表达在性腺和脑。硬骨鱼类有2个编码基因，其中cyp19a1a编码卵巢型芳香化酶(P450aromA)，cyp19a1b编码脑型芳香化酶(P450aromB)。但是日本鳗鲡的脑和卵巢芳香化酶由同一个cyp19a1基因编码，可能在基因组复制后的进化过程中丢失了1个，保留的拷贝同时含有脑和性腺功能。大多数硬骨鱼类的cyp19a1a和cyp19a1b基因有各自独立的表达调控区和表达机制，它们的启动子序列差别较大。在单个cyp19a1基因编码的两栖类和大多数哺乳动物中，它们的组织特异性表达是通过组织特异性的启动子和可变剪接完成的，在表达部位性腺和脑分别有组织特异性的启动子PII和I.f。而进化上更高等的人类cyp19a1除了在脑和性腺表达外，在很多器官也有表达，在不同器官由组织特异性的启动子和转录后的可变剪接形成不同的转录本。

目前，cyp19a1基因启动子已在金鱼、斑马鱼、罗非鱼、欧洲鲈鱼等多种硬骨鱼类得到克隆，但有关日本鳗鲡芳香化酶cyp19a1基因启动子，特别是脑型cyp19a1基因启动子方面的转录调控机制研究尚未见报道。日本鳗鲡芳香化酶cyp19a1基因启动子的克隆及其强启动子活性的诱导表达分析，为研究日本鳗鲡芳香化酶cyp19a1基因的表达调控及细胞信号转导调控网络提供良好的试验系统，可用于促进性腺发育成熟的药物筛选。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，提供了一种日本鳗鲡芳香化酶cyp19a1基因启动子及其应用，解决了上述背景技术中的问题。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案之一是：提供了日本鳗鲡芳香化酶cyp19a1基因启动子，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案之二是：提供了含有上述启动子的表达盒、重组载体、转基因细胞系、重组菌或重组病毒。

优选地，所述表达盒由上述的启动子、由上述启动子启动转录的目的基因和终止子组成。

优选地，所述重组载体为pGL3-basic、pGL2-Basic、pGL4.10、pGLuc。

优选地，所述重组菌为大肠杆菌、枯草杆菌、乳酸菌、酵母菌。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案之三是：提供了上述日本鳗鲡芳香化酶cyp19a1基因启动子在构建真核表达载体、鱼类细胞或哺乳动物细胞中高效表达外源基因中的应用。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案之四是：提供了上述日本鳗鲡芳香化酶cyp19a1基因启动子在促进性腺发育的药物筛选中的应用。