[发明专利]一种短DNA片段3’端生物素标记的方法

说明书

本发明公开了一种短DNA片段3’端生物素标记的方法，包括：(1)以待标记DNA片段单链为短链，设计与短链部分互补的DNA单链为长链，所述长链从5’端到3’端方向包括第一序列和第二序列，所述第一序列与短链互补，且第一序列与短链互补配对后在第一序列5’端留出一个A碱基；(2)配制DNA标记的反应体系；(3)利用PCR仪进行DNA标记反应。本发明通过普通taq酶在短DNA片段3’端快速标记上生物素的方式，快速便捷地获得用于检测microRNA的Northern blot探针。该方法操作简单方便，周期短，成本低，实用性强。

技术领域

本发明属于分子生物学领域，具体涉及一种短DNA片段3’端生物素标记的方法。

背景技术

DNA探针标记是分子生物学和基因工程研究中一种重要的实验技术，如用带有生物素标记的探针去检测某个基因的表达。探针一般可由生物公司直接合成带有标记的引物(单链DNA)，或者购买相关试剂盒(参考碧云天EMSA探针生物素标记试剂盒货号GS008)对合成的引物进行标记。但是生物公司直接合成带有标记的探针价格昂贵、周期较长且合成的一个只能单一使用；而利用购买的现有试剂盒进行标记核酸互补序列，虽然周期较短，可灵活标记不同探针，但是受限于目前试剂盒的价格依然较贵、且次数有限以及步骤繁琐等。

因此，开发一种快速、低成本的利用生物素标记的DNA探针方法具有重要意义。

发明内容

为了解决现有技术中的不足，本发明旨在提供一种短DNA片段3’端生物素标记的方法，该方法利用Taq酶能够从5’→3’端进行复制且耐高温的特性，设计与待标记DNA单链部分互补的长链DNA单链，且利用长链和短链部分互补并在末尾留出与U互补的A碱基(见模式图1)，使得强制给短链3’端添加上带有生物素的U。具体技术方案如下：

本发明第一方面提供一种短DNA片段3’端生物素标记的方法，包括如下步骤：

(1)以待标记DNA片段单链为短链，设计与短链部分互补的DNA单链为长链，所述长链从5’端到3’端方向包括第一序列和第二序列，所述第一序列与短链互补，且第一序列与短链互补配对后在第一序列5’端留出一个A碱基；

(2)配制DNA标记的反应体系；

(3)利用PCR仪进行DNA标记反应，反应条件如下，反应结束后，即得3’端生物素标记的DNA片段；

进一步地，所述短链的长度为18-24bp；

所述长链的长度为50-59bp。

进一步地，所述短链的浓度为5-10mM；

所述长链的浓度为5-10mM。

进一步地，所述Taq酶选自rTaq。

本发明第二方面提供一种DNA 3’端生物素标记的试剂盒，其包括Taq酶、Taq酶Buffer、Biotin-11-dUTP和RNase free H₂O。

进一步地，所述试剂盒用于DNA 3’端生物素标记的操作如上述方法所述。

本发明第三方面提供短DNA片段3’端生物素标记的方法或DNA 3’端生物素标记的试剂盒在Northern blot DNA探针生物素标记中的应用；

进一步地，所述Northern blot DNA探针用于检测microRNA的含量。

本发明的有益效果为：