[发明专利]引物探针组合以及试剂盒

说明书

本发明涉及医学检测技术领域，特别涉及引物探针组合以及试剂盒。本发明提供了一种快速检测人CYP2C19基因多态性的方法和试剂盒，具体涉及基因多态性检测特异性引物、探针和试剂盒。所述引物和探针包括CYP2C19*2引物及探针、CYP2C19*3引物及探针、CYP2C19*17引物及探针、内控引物及探针。本发明的引物、探针和试剂盒具有特异性强、灵敏度高、操作简单的特点，可准确检出低值0.1ng/μL的基因组DNA。本发明还提供一种检测试剂盒，包含CYP2C19基因多态性检测特异引物、探针、dNTPs、rTth酶及UDG酶。

技术领域

本发明涉及医学检测技术领域，特别涉及引物探针组合以及试剂盒。

背景技术

细胞色素CYP450是存在于肝细胞中代谢药物的主要酶系，其包含的CYP2C19基因对多种药物的代谢具有重要影响，许多内源性物质及临床上约2％的药物都由CYP2C19酶催化代谢。研究表明CYP2C19酶可影响氯吡格雷、苯妥英钠、地西泮等多种临床药物的代谢，其基因多态性是引起个体间和种族间对同一种药物表现出代谢差异的主要原因。2010年美国FDA要求氯吡格雷药物标签上注明CYP2C19与疗效的关系，并建议使用前检测CYP2C19基因型。

CYP2C19基因包含多个等位基因，其中CYP2C19*1为野生型等位基因，编码的酶具有正常生物活性。CYP2C19*2、CYP2C19*3和CYP2C19*17是在中国人群中突变频率较高的等位基因。CYP2C19*2和CYP2C19*3为功能缺失或降低的等位基因，可引起CYP2C19编码的酶的催化活性降低，代谢底物的能力减弱，生成的活性代谢产物减少，从而引起药物不良反应。CYP2C19*17为功能获得型等位基因，可提高CYP2C19基因编码的酶的催化活性，代谢底物能力增强。CYP2C19基因的遗传变异导致CYP2C19酶活性的个体差异，使人群出现超快代谢者、快代谢者、中间代谢者和慢代谢者。

氯吡格雷又称波立维，是一种抗血小板药物，广泛用于急性冠脉综合征患者、心肌梗死和确诊外周动脉疾病的患者，可有效减少动脉粥样硬化性事件的发生(如心肌梗死、中风和血管性死亡)。氯吡格雷作为一种前体药物，本身无药理活性，主要经CYP2C19酶代谢活化，产生活性代谢产物，发挥抗血小板效应。美国FDA在2010年3月要求氯吡格雷的产品说明书上加上黑格标签，警告弱代谢者服用氯吡格雷疗效不佳，建议医师可以通过检测CYP2C19的基因型来了解患者氯吡格雷的代谢能力，对于氯吡格雷弱代谢者可给患者选用其它抗凝血药物。

目前对于不同的基因多态性位点的检测方法很多，如Sanger测序法、等位基因特异性PCR(Allele-specific PCR，AS-PCR)、PCR-SSO法：SSO技术即是顺序特异寡核苷酸法(Sequence Specific Oligonucleotide，SSO)、PCR-SSP法、高分辨率溶解曲线法(HighResolution Melting Analysis，HRM)、PCR-限制性片段长度多态性方法、基因芯片法、荧光定量PCR法等。