[发明专利]一种绵羊精液低温保存抗氧化稀释液及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种绵羊精液低温保存抗氧化稀释液及其制备方法与应用。本发明绵羊精液低温保存抗氧化稀释液包括含Mito‑tempo的基础液和浓度为0～16mM的谷胱甘肽，最适宜的添加量为4mM，基础液以100mL计含有如下成分：2.7g Tris，0.96g果糖，1.375g柠檬酸，15mL卵黄，214μL、17.53mM白藜芦醇，151.1μL、33.09mM槲皮素，612μL、4.90mM Mito‑tempo，双蒸水定容至100mL。本发明操作简便，应用成本低廉，效果显著，对动物不产生任何有害影响，可显著提高优良公畜的利用率，为提高绵羊低温保存精液提供了新途径，在绵羊精液保存及相关的胚胎移植产业和胚胎工程中广泛应用，具有广阔的市场前景。

技术领域

本发明属于畜牧领域，尤其涉及一种绵羊精液低温保存抗氧化稀释液及其制备方法与应用。

背景技术

随着我国肉羊产业规模化、集约化发展，绵羊人工授精技术的需求也日益增加，绵羊精液的保存是人工授精的一个重要步骤，直接影响人工授精后母羊的受胎率，提高精液保存质量一直是畜牧工作者的一项重要工作。

绵羊精液的保存方法主要有常温保存、低温保存和冷冻保存三种。精液在常温下由于保存时间短(1～3天)，使得人工授精技术受到时间和空间的限制。目前，虽然绵羊精液冷冻保存技术也取得了较大进步，能实现40％～60％的精子在解冻后仍然保持活动性，但其中仅有30％左右的精子能保持快速的运动能力和相对稳定的受精能力。如果通过子宫颈输精，绵羊冻精的受胎率仍然与鲜精差距很大(低20～30％)，只能通过成本和技术门槛相对较高的腹腔镜方式输精，极大限制了冷冻精液在绵羊生产中的推广应用。低温保存是一种操作简单、保存效果相对较好的精液保存方法，与常温保存相比，克服了保存时间短的弊端，扩大了优秀种公羊精液的辐射范围；与冷冻保存相比，低温保存可降低生产成本，并且可以有效减少冷冻保存产生的冷冻损伤，提高精子活率和母羊的受胎率。在绵羊遗传改良过程中，应用精液的低温保存技术可以延长精液的保存时间，有效提高种公羊的利用率，因此绵羊低温保存技术对我国养产业的发展具有重要的意义。

精液的低温冷冻保存技术能充分利用优良种畜的遗传资源，迅速扩大畜群的良种比例；同时，此技术也是治疗哺乳动物不孕症的有效辅助手段。低温保存主要是在0～5℃温度条件下保存，精子的代谢和活动会随着温度逐渐降低而受到抑制，对营养物质的需求降低。但是，随着精液保存时间的延长，精子内活性氧自由基(ROS)会大量积累，过量的ROS会氧化损伤精子的结构和功能，进而影响精液品质。

精液稀释液能为体外保存的精子提供保护和营养，对精子的活率和受精能力有重要的影响。在稀释液中通常会添加有某些特殊作用的物质，以满足精子在体外生存的各种需要，能够达到调控稀释液的渗透压、酸碱度、抑制稀释液中的细菌滋生，改变精子生存环境，满足精子长期生存需求的目的。

绵羊精液低温保存技术还不成熟，在生产上的应用还十分有限，制约了优选种公羊的利用和人工授精技术的推广应用。因此，提高绵羊低温保存精液的品质，延长精子体外保存效果是畜牧生产和科学研究所必需的。

发明内容

本发明的首要目的在于提供一种能提高绵羊精液低温保存品质的绵羊精液低温保存抗氧化稀释液。

本发明的再一目的在于提供上述绵羊精液低温保存抗氧化稀释液的制备方法。

本发明的另一目的在于提供上述绵羊精液低温保存抗氧化稀释液在提高绵羊精液低温保存品质中的应用。

本发明是这样实现的，一种绵羊精液低温保存抗氧化稀释液，该绵羊精液低温保存抗氧化稀释液包括含Mito-tempo的基础液和浓度为2～16mM的谷胱甘肽。

优选地，所述基础液以100mL计含有如下成分：2.7g Tris，0.96g果糖，1.375g柠檬酸，15mL卵黄，214μL、17.53mM白藜芦醇，151.1μL、33.09mM槲皮素，612μL、4.90mM Mito-tempo，双蒸水定容至100mL。