[发明专利]一种盐酸雷尼替丁样品的前处理方法

说明书

本发明公开了一种盐酸雷尼替丁样品的前处理方法，包括以下步骤：S1、称取盐酸雷尼替丁样品，所述盐酸雷尼替丁样品中含有杂质N‑亚硝基二甲胺；S2、配制盐酸雷尼替丁供试品溶液，使所述盐酸雷尼替丁供试品溶液中N‑亚硝基二甲胺的浓度达到高效液相色谱法的检出限；S3、在盐酸雷尼替丁供试品溶液中加入碱性溶液，碱性溶液与盐酸雷尼替丁中的盐酸完全发生反应，得到雷尼替丁中和溶液；S4、在雷尼替丁中和溶液中加入银离子溶液，银离子与雷尼替丁中的仲氨基完全发生络合反应，生成沉淀。本发明将高浓度雷尼替丁供试品中的雷尼替丁沉淀除去，不产生副产物NDMA，同时保留样品中的NDMA，大幅提高NDMA检测灵敏度，满足各类型号质谱检测要求。

技术领域

本发明涉及盐酸雷尼替丁样品的处理，特别是一种盐酸雷尼替丁样品的前处理方法。

背景技术

N-亚硝基二甲胺(N-nitrosodimethylamine，NDMA)具有强基因毒性、强致畸性和强致癌性，属于2A类致癌物。FDA根据The Carcinogenic Potency Database(CPDB数据库)中的毒理学数据，将NDMA每日摄入限值设为约0.096μg。2019年9月13日，FDA 发布安全警告，一些雷尼替丁药物，其中也包括品牌药Zantac(善卫得)，含有N-二甲基亚硝胺(NDMA)杂质。随后，我国针对该品种展开了NDMA的专项检验检测。

依据《中国药典》2020年版四部9306遗传毒性杂质控制指导原则，盐酸雷尼替丁胶囊中NDMA含量可根据化合物特异性风险评估方法来推导可接受摄入量，即根据导致 50％肿瘤发生率的给药剂量(Median Toxic Dose,半数中毒剂量，TD50)线性外推法来计算化合物特异性的可接受摄入量，TD50线性外推法即通过啮齿类动物致癌性数据来计算杂质的可接受摄入量，NDMA杂质的限值为0.0959μg/(kg·d)÷300mg≈320ng/g。

国内现有检验技术为《关于开展雷尼替丁中N亚硝基二甲胺检验工作的通知》(中检化药函〔2019〕710号)“附件2：HPLC-MS/MS法测定盐酸雷尼替丁原料胶囊和片剂中N-亚硝基二甲胺”。该法采用液质联用法测定，供试品制备法为：取本品内容物适量，约相当于雷尼替丁300mg，至适宜容器中，精密加入甲醇10ml，涡旋混匀1分钟，再振摇40分钟，离心，取上清液滤过，取续滤液即得。经按现有技术测定，雷尼替丁中NDMA 的定量限约为33ppb。

欧盟与FDA现有的检验技术均为液质联用、气质联用。法国国家药品和保健品安全管理局使用HPLC法，但其检测限为8.5ng/ml，无法满足NDMA可接受限度的检验，仅用于初筛。

经仪器对比试验，现有方法对液质联用仪的要求较高，部分型号老旧的仪器仅能达到2ng/mlNDMA浓度的定量限，只有少量较新型号并维护良好的仪器能满足1ng/ml浓度定量限的要求。因此有必要研发一种方法提高耐用性，使大多数仪器均能满足测定需求。

按现有HPLC-MS/MS法测定盐酸雷尼替丁原料胶囊和片剂中N-亚硝基二甲胺的HPLC 部分测定，色谱柱严重过载(供试品溶液浓度为30mg/ml)，同时无法达到NDMA检测限度要求。若需要达到NDMA检测限度要求，供试品溶液浓度还需提高约8倍(供试品溶液浓度约250mg/ml)，在此供试品溶液浓度下，溶液为淡黄色粘稠液体。为保护色谱系统，未直接测定该浓度的溶液。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，针对现有技术不足，提供一种雷尼替丁样品前处理方法，利用高效液相色谱法可准确检测出N-亚硝基二甲胺的含量。

为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：一种盐酸雷尼替丁样品的前处理方法，包括以下步骤：

S1、称取盐酸雷尼替丁样品，所述盐酸雷尼替丁样品中含有杂质N-亚硝基二甲胺；

S2、配制盐酸雷尼替丁供试品溶液，使所述盐酸雷尼替丁供试品溶液中N-亚硝基二甲胺的浓度高于高效液相色谱法的检测限；