[发明专利]一种提高腺病毒生产的WAYNE293 LVPRO细胞培养基添加物及制作方法

说明书

本发明公开了一种提高腺病毒生产的WAYNE293LVPRO细胞培养基添加物及其制作方法。其为胱氨基酸2‑6g/L、天门冬酸双肽2‑3g/L和赖氨酸三肽2‑3g/L。本发明的WAYNE293LVPRO细胞培养基添加物能够显著的提高WAYNE293LVPRO细胞的腺病毒生产能力。并且WAYNE293LVPRO细胞培养基添加物是低成本的无血清无动物来源培养基，对工艺优化与反应器放大，以满足大量表达基因治疗性病毒的需求，对于病毒药物的产业化的意义是非常重大的。

技术领域：

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种提高腺病毒生产的WAYNE293 LVPRO细胞培养基及制作方法。

背景技术：

动物细胞表达的腺病毒药物销售额迅速增长，作为商业化生产腺病毒的核心技术之一的大规模动物细胞悬浮培养成为腺病毒药物发展的新瓶颈。其中之一主要技术限制就是国内没有自己的高效能商业化动物悬浮培养基，而SIGMA、Invitrogen、Hyclone和Lonza等国际知名培养基，每升高达上千元，且配方保密，不利于后续的培养工艺优化。故研制出自主品牌且低成本的无血清无动物来源培养基，对工艺优化与反应器放大，以满足大量表达基因治疗性病毒的需求，对于病毒药物的产业化的意义是非常重大的。

市场病毒药物70％以上都是由HEK203细胞宿主细胞表达。目前WAYNE293 LVPRO细胞没有培养基添加剂专门设计用于HEK293细胞的生长和悬浮培养条件下病毒的表达。现希望发明一种新型WAYNE293 LVPRO细胞培养基添加物增加腺病毒的产量。

发明内容：

本发明的第一个目的是提供能够显著增加WAYNE293 LVPRO细胞腺病毒产量的提高腺病毒生产的WAYNE293 LVPRO细胞培养基添加物。

所述的提高腺病毒生产的WAYNE293 LVPRO细胞培养基添加物，其为胱氨基酸2-6g/L、天门冬酸双肽2-3g/L和赖氨酸三肽2-3g/L。

优选，所述的提高腺病毒生产的WAYNE293 LVPRO细胞培养基添加物，其为胱氨基酸4g/L,天门冬酸双肽2.5g/L和赖氨酸三肽2.5g/L。

本发明的第二个目的是提供提高腺病毒生产的WAYNE293 LVPRO细胞培养基添加物的制作方法，其是将各成分按其含量加入到水中，除菌制得。

本发明的WAYNE293 LVPRO细胞培养基添加物能够显著的提高WAYNE293 LVPRO细胞的腺病毒生产能力。并且WAYNE293 LVPRO细胞培养基添加物是低成本的无血清无动物来源培养基，对工艺优化与反应器放大，以满足大量表达基因治疗性病毒的需求，对于病毒药物的产业化的意义是非常重大的。

具体实施方式：

以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。

实施例1：

1.商业化的AAV病毒载体质粒、包装质粒和辅助质粒(均购自合肥赛海生物科技有限公司)，浓度大于1ug/ul，A260/280在1.7-1.8间方可。

2.以5×10⁵个/ml的细胞浓度接种WAYNE293 LVPRO细胞(其公开于申请号CN202110688920.7，发明名称：一种适应无血清培养基环境的WAYNE293 LVPRO细胞及其应用的申请中，其保藏信息是：人胚胎肾细胞WAYNE 293于2021年5月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101，保藏编号为：CGMCC No.22348)，37℃，120rpm摇床培养4天后，WAYNE293 LVPRO细胞浓度达到5-10×10⁶个/ml。

3.做脂转complex，按照以下比例混合