[发明专利]瑶药白背三七中吡咯里西啶生物碱的含量测定方法

说明书

本发明公开了一种瑶药白背三七中吡咯里西啶生物碱的含量测定方法，具体包括：混合对照品溶液的制备、供试品溶液的制备、用高效液相色谱‑质谱联用仪在限定的色谱质谱条件下进样测定，然后依据外标法计算7种吡咯里西啶生物碱的含量等步骤。采用本发明方法可同时测定白背三七中芝麻菜叶千里光碱氮氧化物、春千里光碱、春千里光碱氮氧化物、倒千里光碱、千里光菲灵碱、千里光宁碱和野百合碱7种吡咯里西啶生物碱的含量，该检测方法简单、稳定性好、分析速度快、检测结果准确，采用该方法能够科学、合理地对白背三七中吡咯里西啶生物碱的风险进行评估，提高用药安全性；为白背三七中吡咯里西啶生物碱质量控制和安全性评价提供科学依据。

技术领域

本发明属于中药材检测技术领域，具体涉及瑶药白背三七中吡咯里西啶生物碱的含量测定方法。

背景技术

白背三七Gynura divaricata（L.）DC.为菊科三七草属植物白子菜的全草，白背三七的根、茎、叶均可入药，其根味甘、凉，具有清热，活血，止血的功效，主治咳嗽，疮疡，烫火伤，跌打损伤，风湿痛，崩漏，外伤出血。白背三七作为广西常用壮瑶药，可以用于治疗多种炎症。民间以其食、药两用，广泛用于治疗胃病、高血压病、高血脂症及糖尿病等。近年来，国内外学者从白背三七地上部分分离得到了黄酮类、三萜类、甾醇类、核苷类以及生物碱类等化学成分。李丽梅等采用LC-MS技术对白背三七中的吡咯里西啶生物碱的结构进行了检测和分析，从白背三七叶片的生物碱提取物中检测出了肝毒性吡咯里西啶生物碱。

吡咯里西啶生物碱(Pyrrolizidine Alkaloids，PAs)是有花植物为防御食草性动物而产生的一种次生代谢产物，世界上约3％的有花植物(6000多种)含有吡咯里西啶生物碱，且以游离的吡咯里西啶生物碱及其氮氧化物两种形式存在；迄今为止，PAs已在13个科的植物中检出。据报道，吡咯里西啶生物碱（Pyrrolizidine Alkaloids，PAs）及其N-氧化物广泛存在于菊科、紫草科、夹竹桃科等植物中，在吡咯啶环的1，2位为双键的PAs成分，具有较强肝脏毒性，称为肝毒性吡咯里西啶生物碱(Hepatotoxic pyrrolizidine alkaloids，HPAs)，HPAs可引起不可逆的肝细胞损伤，并导致肝窦阻塞综合征(Hepatic sinusoidalobstruction syndrome，HSOS)、肝巨细胞症，过量或长期摄入，严重可造成肝硬化和肝纤维化等不良后果。国内因服用含有HPAs的中药，如菊三七(又名土三七)、千里光等引起HSOS的病例每年都有报道。除肝毒性，PAs还对肺、心、肾、胰、脑等具有毒性及明显的致癌、致突变、致畸胎作用；如长期服用该药材存在较大安全风险。

白背三七中除主要含有黄酮、三萜、甾醇及核苷类化学成分外, 还含有肝毒性吡咯里西啶生物碱，存在一定的用药风险，因此，建立白背三七中吡咯里西啶生物碱检测方法，全面且准确地测定白背三七中吡咯里西啶生物碱的含量，对于评估白背三七的食品安全性及加强对白背三七中吡咯里西啶生物碱含量的监管具有重要作用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种瑶药白背三七中吡咯里西啶生物碱的含量测定方法，采用超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）法同时测定白背三七中芝麻菜叶千里光碱氮氧化物、春千里光碱、春千里光碱氮氧化物、倒千里光碱、千里光菲灵碱、千里光宁碱和野百合碱7种吡咯里西啶生物碱（结构式见图1）的含量。该方法稳定可行，采用该方法能够科学、合理地对白背三七中吡咯里西啶生物碱的风险进行评估，提高用药安全性；为白背三七中吡咯里西啶生物碱质量控制和安全性评价提供科学依据。

为实现上述目的，本发明采用如下的技术方案：

一种瑶药白背三七中吡咯里西啶生物碱的含量测定方法，采用UPLC-MS/MS法进行同时测定白背三七中芝麻菜叶千里光碱氮氧化物、春千里光碱、春千里光碱氮氧化物、倒千里光碱、千里光菲灵碱、千里光宁碱和野百合碱7吡咯里西啶生物碱的含量，具体包括如下步骤：

（1）混合对照品溶液的制备