[发明专利]一种全细胞肿瘤疫苗支架及其制备方法

说明书

本发明提供一种全细胞肿瘤疫苗支架的制备方法，包括以下步骤：S1、配置支架基质材料、交联剂/光引发剂、肿瘤细胞、免疫佐剂的混合溶液；S2、固化S1得到的混合溶液，冷冻干燥后得到全细胞肿瘤疫苗支架。该支架制备过程简单，一步冻干法完成全细胞肿瘤疫苗抗原制备、支架制备和抗原装载。植入肿瘤切除部位，其中冻干的肿瘤细胞作为全细胞肿瘤抗原，辅以免疫佐剂，获得的具有大孔3D结构的疫苗支架可作为免疫发生中心招募树突状细胞并促进其成熟，从而激发抗肿瘤免疫反应，用于防止肿瘤术后复发和转移。

技术领域

本发明涉及生物材料领域，具体涉及一种基于冷冻干燥技术的全细胞肿瘤疫苗支架及其制备方法。

背景技术

癌症严重威胁人类健康，基于肿瘤疫苗的免疫治疗具有极大的发展前途及应用潜力。尽管肿瘤疫苗发展迅速，但仍存在治疗效果有限、生产工艺复杂等问题。例如，树突状细胞疫苗需要在体外进行细胞分离、修饰和筛选，之后进行体内移植，导致生产周期长、价格昂贵，且超过90％的移植树突状细胞在归巢到淋巴结前死亡，使得效应T细胞的启动不足。肿瘤细胞疫苗、抗原或多肽疫苗等将树突状细胞在体内直接活化，但存在引发T细胞免疫应答能力有限、需反复注射等问题，极大地限制了其广泛应用。因此，开发新兴且便捷的肿瘤疫苗递送系统具有很强的临床应用前景和价值。利用生物材料递送疫苗、提高疗效是近几年研发的热点。相比于纳米材料，生物材料支架不仅可作为抗原和免疫调节生物制剂的递送系统，同时可原位募集免疫细胞。生物材料支架能够对抗原和免疫调节生物制剂的释放进行时间和空间的控制，从而实现对招募的树突状细胞进行原位诱导和活化，进而产生强有力的细胞毒性T淋巴细胞的免疫反应，提高抗肿瘤效果。

然而，目前基于生物材料支架的肿瘤疫苗制备过程繁琐，主要包括：肿瘤抗原的制备、生物材料支架的制备和抗原的装载。常用的肿瘤抗原包括特定抗原(如蛋白或多肽)，和全细胞抗原(如肿瘤细胞裂解物或放疗致死的肿瘤细胞)。蛋白/多肽疫苗通常只能靶向一种或几种肿瘤相关抗原，若要引发机体更为强烈的肿瘤特异性T细胞响应，往往需要在疫苗接种时混合多种抗原。由于肿瘤细胞上存在一系列突变的肿瘤抗原，全肿瘤细胞抗原比通用的肿瘤抗原免疫原性更强，可以协同增强机体产生特异性免疫应答。但全细胞肿瘤抗原的制备需特殊的处理，如反复冻融、放疗、化疗等。另外，在生物支架材料制作完成后，往往需要将肿瘤抗原进行额外担载，进一步使过程复杂化。因此，寻找更简单的方法制备基于生物材料支架的肿瘤疫苗意义重大。

发明内容

本发明针对现有技术中的不足，提供一种全细胞肿瘤疫苗支架的制备方法。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种全细胞肿瘤疫苗支架的制备方法，包括以下步骤：

S1、配置支架基质材料、交联剂/光引发剂、肿瘤细胞、免疫佐剂的混合溶液；

S2、固化S1得到的混合溶液，冷冻干燥后得到全细胞肿瘤疫苗支架。

为优化上述技术方案，采取的具体措施还包括：

进一步地，步骤S1中，所述支架基质材料为胶原、明胶、海藻酸钠、壳聚糖、透明质酸、明胶-甲基丙烯酸甲酯、海藻酸钠-甲基丙烯酸甲酯、壳聚糖-甲基丙烯酸甲酯、透明质酸-甲基丙烯酸甲酯中的一种或多种的混合。

进一步地，步骤S1中，所述交联剂/光引发剂为戊二醛、甲醛、钙盐、京尼平、丹宁酸、苯基-2,4,6-三甲基苯甲酰基膦酸锂(LAP)、2-羟基-2-甲基-1-[4-(2-羟基乙氧基)苯基]-1-丙酮(2959)、2-羟基-2-甲基-1-苯基-1-丙酮(HMPP)中的一种或多种的混合。

进一步地，步骤S1中，所述免疫佐剂为咪喹莫特、CpG寡聚脱氧核苷酸、聚肌苷酸胞苷酸、单磷酰脂质A中的一种。

进一步地，步骤S2中，固化方法为光聚合固化或交联反应固化。