[发明专利]一种改造体抗菌肽dsNCM1及其应用

说明书

本发明涉及一种改造体抗菌肽dsNCM1及其应用，该改造体抗菌肽dsNCM1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，其第1位和第16位半胱氨酸之间形成二硫键。本发明的改造体抗菌肽dsNCM1相比于未改造的绿海龟抗菌肽以及现有的绿海龟抗菌肽改造体，具有更广的抗菌谱、更强的抗炎活性和抗生物膜活性，对多种细菌、炎性因子都有较强的抑制作用。本发明还基于该改造体抗菌肽dsNCM1开发了一种药物组合物，与多种抗生素联用都具有协同抗菌作用。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种改造体抗菌肽dsNCM1及其应用。

背景技术

近年我国年上岸产卵绿海龟数量急剧下降，中国海龟保护行动计划鼓励通过海龟全人工繁育，探索野外种群补充新途径，以加快野生海龟资源恢复。但人工条件下亲龟活动空间受限，环境和食物的改变也会对子代的生长发育产生较大影响；水质变坏、体表外伤等容易导致龟苗染病，甚至大量死亡。目前，海龟疾病诊断和治疗困难，给人工繁育尤其龟苗规模化培育带来极大困扰。海水中的细菌会造成较为严重的细菌疾病，对大多数海水养殖对象包括鱼、虾、蟹和贝壳类等，均有不同程度危害。在人工养殖条件下，饵料和环境变差可导致海龟体质下降，易感染寄生类、消化呼吸类及营养类疾病。海龟常见疾病多由细菌、真菌和病毒感染引起，一般表现为肛门肿大、四肢及腹甲发炎或体表多处皮肤、甲壳糜烂等。如海龟腐甲病是环境恶化引起的一种常见的细菌、真菌混合感染疾病，若不加以控制，海龟会出现停食、精神萎靡和大面积糜烂，直至死亡。目前已有大量相关药敏实验来寻找绿海龟龟苗培育中常见疾病的治疗方法，虽然传统抗生素类药物在一定程度上减少了疾病的发生和提高动物生产性能，但抗生素等药物的残留和细菌耐药性等问题日渐严重，从而引发了人们对绿色养殖和食品安全的极大关注。

从上世纪末开始，越来越多的国家开始呼吁禁用抗生素，因此，无毒无公害的新型抗菌剂代替抗生素作为饲料添加剂已成为重要发展趋势。抗菌肽是核糖体合成的天然抗生素，是多细胞生物体免疫系统的一部分。抗菌肽的来源广泛，氨基酸的组成和结构差异很大，具有快速杀伤以及广谱的抗菌活性。抗菌肽是先天免疫反应的进化保守产物，可保护宿主免受昆虫、植物、细菌等产生的多种微生物的侵害。同抗生素相比，抗菌肽的优势在于具有广谱的抗菌活性、对宿主的选择性细胞毒性和不易诱导耐药性等。由于抗菌素耐药性的惊人增加，人们对抗菌肽作为替代抗菌素制剂的兴趣已愈来愈浓厚。这些具有天然抗生素之称的抗菌肽对革兰氏细菌有较强的杀伤作用，阳离子抗菌肽直接与带负电的细菌细胞膜结合，使其细胞膜通透性增加从而导致细菌死亡。抗菌肽功能特性应用也比较广泛，如抗菌活性、抗癌活性等。但目前关于绿海龟抗菌肽的研究尚不深入，因此本发明针对绿海龟抗菌肽进行改造获得一种新的抗菌肽。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供了一种绿海龟(Chelonia mydas)抗菌肽Cm-CATH2的改造体抗菌肽dsNCM1，具有更广的抗菌谱以及更强的抗炎活性，对多种细菌和炎性因子都有较强的抑制作用。

本发明的第一个目的是提供一种改造体抗菌肽dsNCM1，所述改造体抗菌肽dsNCM1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，序列为：

Cys¹Phe²Arg³Arg⁴Val⁵Arg⁶Arg⁷Gln⁸Leu⁹Gly¹⁰Arg¹¹Val¹²Leu¹³Arg¹⁴ His¹⁵Cys¹⁶Ser¹⁷Arg¹⁸Ile¹⁹Thr²⁰Val²¹Gln²²Gln²³Arg²⁴Met²⁵Arg²⁶Phe²⁷。