[发明专利]松墨天牛抗菌肽及其编码基因和应用

说明书

本发明公开了松墨天牛抗菌肽及其编码基因和应用，本发明方案针对目前松墨天牛抗菌肽基因家族不完整的问题，提出了四种松墨天牛抗菌肽MaltCec、MaltDef、MaltAtt‑1、MaltAtt‑2及其对应的抗菌肽基因和对应的外源表达载体及产物，同时，还揭示了对应诱导表达和纯化方法，本方案丰富了松墨天牛抗菌肽基因家族,实现了松墨天牛抗菌肽基因MaltCec、MaltDef、MaltAtt‑1、MaltAtt‑2的外源表达；本发明方案还成功的利用毕赤酵母将松墨天牛抗菌肽MaltCec、MaltDef、MaltAtt‑1、MaltAtt‑2基因表达，同时证明其具有抑菌活性，本方案的松墨天牛抗菌肽抑菌效果佳、其制备可靠稳定且具有积极应用前景。

技术领域

本发明涉及生物基因工程技术领域，尤其涉及松墨天牛抗菌肽及其编码基因和应用。

背景技术

抗菌肽是宿主非特异性免疫防御系统产生的一类对抗外源性病原体的肽类活性物质，是天然免疫的效应分子。近些年来,随着传统抗生素的大量使用,耐药细菌的出现,为人类的健康带来了巨大的隐患。抗菌肽具有广谱抗细菌、真菌、病毒、寄生虫的活性,且不易产生耐药菌株的优点。目前作为抗生素的替代品或者与抗生素协同作用有望成为新的抗菌药物,具有广阔的应用价值和开发前景。

重组蛋白表达技术能够高效大量获得目的蛋白,与其他真核及原核表达系统相比,毕赤酵母表达系统具有易于操作,多种转录后修饰(如多肽折叠,酰化,糖基化,甲基化等),遗传系统稳定及蛋白可高水平表达等优点。

在现有技术中：尹娜等在毕赤酵母中表达了抗菌肽Cecropin D(尹娜,中国生物制品学杂志,2008)；王珍等在毕赤酵母中表达了抗菌肽Cecropin AD(王珍等, 中国畜牧杂志,2010；金丰良等在毕赤酵母中克隆表达了家蝇防御素Defensin(金丰良,中山大学学报,2006)；吴松泉等在毕赤酵母中表达了致倦库蚊防御素 Defensin(吴松泉,免疫学杂志,2013)；然而，松墨天牛抗菌肽基因家族不完整，其相应的研究也较少，因此，针对松墨天牛进行研究，丰富其抗菌肽基因家族是非常具有现实意义的研究课题。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提出一种抑菌效果佳、制备可靠稳定且具有积极应用前景的松墨天牛抗菌肽及其编码基因和应用。

为了实现上述的技术目的，本发明所采用的技术方案为：

一种松墨天牛抗菌肽，所述松墨天牛抗菌肽为松墨天牛抗菌肽MaltCec、松墨天牛抗菌肽MaltDef、松墨天牛抗菌肽MaltAtt-1或松墨天牛抗菌肽 MaltAtt-2；

其中，

松墨天牛抗菌肽MaltCec的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，

松墨天牛抗菌肽MaltDef的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，

松墨天牛抗菌肽MaltAtt-1的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，

松墨天牛抗菌肽MaltAtt-2的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。

基于上述，本发明还提供编码上述所述松墨天牛抗菌肽的基因，其中，

编码松墨天牛抗菌肽MaltCec的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，

编码松墨天牛抗菌肽MaltDef的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示，

编码松墨天牛抗菌肽MaltAtt-1的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示，

编码松墨天牛抗菌肽MaltAtt-2的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示。

基于上述，本发明还提供含有上述所述基因的表达载体。