[发明专利]一种抗大熊猫PRL单克隆抗体、杂交瘤细胞株及PRL酶联免疫检测方法在审
| 申请号： | 202210475381.3 | 申请日： | 2022-04-29 |
| 公开（公告）号： | CN114624452A | 公开（公告）日： | 2022-06-14 |
| 发明（设计）人： | 蔡开来;张梦诗;王东辉;王神飞;胡贤彪;李非平;王涓;刘玉良;侯蓉;兰景超;吴永胜 | 申请（专利权）人： | 成都大熊猫繁育研究基地 |
| 主分类号： | G01N33/74 | 分类号： | G01N33/74;G01N33/577;G01N33/543;C07K16/26;C12N5/20;C12R1/91 |
| 代理公司： | 成都正德明志知识产权代理有限公司 51360 | 代理人： | 张小娟 |
| 地址： | 610081 四川*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 抗大 熊猫 prl 单克隆抗体 杂交瘤 细胞株 免疫 检测 方法 | ||
1.一种大熊猫催乳素酶联免疫检测方法，其特征在于，以杂交瘤细胞株PRL-1和/或杂交瘤细胞株PRL-5分别产生的抗大熊猫PRL单克隆抗体进行检测；
其中，所述杂交瘤细胞株PRL-1的保藏编号为CCTCC NO:C202183；杂交瘤细胞株PRL-5的保藏编号为CCTCC NO:C202172，均于2021年10月28日保藏于中国典型培养物保藏中心。
2.根据权利要求1所述的大熊猫催乳素酶联免疫检测方法，其特征在于，对大熊猫催乳素进行检测时，使用杂交瘤细胞株PRL-1和杂交瘤细胞株PRL-5产生的抗大熊猫PRL单克隆抗体分别作为一抗或二抗。
3.根据权利要求1所述的大熊猫催乳素酶联免疫检测方法，其特征在于，所述抗大熊猫PRL单克隆抗体由氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的大熊猫催乳素特异序列作为免疫原，并由杂交瘤细胞株PRL-1和PRL-5分泌。
4.根据权利要求1～3任一项所述的大熊猫催乳素酶联免疫检测方法，其特征在于，以大熊猫尿液作为检测底物。
5.根据权利要求4所述的大熊猫催乳素酶联免疫检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将大熊猫尿液加入至抗大熊猫PRL单克隆抗体包被的酶标板中，同时加入PRL重组蛋白标准品，于35～37℃孵育30～35min；
(2)用洗涤液洗涤酶标板后，加入抗大熊猫PRL单克隆抗体-HRP复合物，于35～37℃孵育30～35min；
(3)用洗涤液洗涤酶标板后，加入底物显色试剂，于室温孵育5～10min后，加入反应终止液停止反应；
(4)用酶标仪测量并计算PRL含量即可。
6.权利要求1～5任一项所述的检测方法，或权利要求1～3任一项所述的抗大熊猫PRL单克隆抗体在对大熊猫妊娠期的胚胎发育监测中的应用。
7.一种试剂盒，其特征在于，包括权利要求1～3中任一项所述的杂交瘤细胞株PRL-1和/或杂交瘤细胞株PRL-5分别产生的抗大熊猫PRL单克隆抗体。
8.一种载体，其特征在于，包括权利要求1～3中任一项所述的抗大熊猫PRL单克隆抗体。
9.权利要求7所述的试剂盒，或权利要求8所述的载体在大熊猫催乳素检测，或对大熊猫妊娠期的胚胎发育监测中的应用。
10.一种抗大熊猫PRL单克隆抗体杂交瘤细胞株，其特征在于，所述杂交瘤细胞株为杂交瘤细胞株PRL-1和/或杂交瘤细胞株PRL-5，所述杂交瘤细胞株PRL-1的保藏编号为CCTCCNO:C202183；杂交瘤细胞株PRL-5的保藏编号为CCTCC NO:C202172，均于2021年10月28日保藏于中国典型培养物保藏中心。
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