[发明专利]一种检测试剂盒及其应用

说明书

本发明提供了一种检测试剂盒或芯片及其应用。该检测试剂盒或芯片包含耶氏肺孢子菌、弓形虫和/或荚膜组织胞浆菌的引物和/或探针。本发明的检测试剂盒或芯片能同时或单独检测上述三种病原体，提高疾病的诊断效率，降低医务人员的工作强度，提高患者的治疗效率。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种耶氏肺孢子菌、弓形虫和荚膜组织胞浆菌的检测引物组、检测试剂盒或芯片及应用。

背景技术

肺孢子菌肺炎(Pneumocystis pneumonia，PCP)是由耶氏肺孢子菌(Pneumocystis jirovecii，PJ) 感染引起的肺炎，是免疫缺陷患者重要的致死原因。肺孢子菌肺炎临床表现缺乏特异性，以发热、干咳、呼吸困难最常见，其他症状包括嗜睡、恶心、呕吐、腹泻、体重下降等；患者肺部听诊可无异常或闻及干、湿性啰音，大多表现为症状与体征的严重程度不成比例。

弓形虫病(Toxoplasmosis)是由弓形虫(Toxoplasma gondii，TG)引起的一种人畜共患寄生原虫病。该虫体主要侵犯眼、脑、心等器官，寄生于有核细胞内，人体通常表现为隐性感染，不表现明显症状，因此常被漏诊和误诊。但是当人体免疫功能受损或低下时，特别是感染艾滋病的病人，可由弓形虫隐性感染转为弓形虫病急性发作，出现急性症状，严重者可造成死亡。

荚膜组织胞浆菌病(HistopLasmosis，HP)是由荚膜组织胞浆菌(Histoplasma capsulatum，HC)引起的具有传染性的深部真菌病，经呼吸道传染，也可经皮肤、胃肠道黏膜受染，其发病初往往易误诊，使病情迁延加重。由于荚膜组织胞浆菌病主要侵犯肺和单核吞噬细胞系统，临床表现各种各样，可有发热、肝脾肿大、贫血、少数有皮肤黏膜损害，可在有免疫功能降低或缺陷的AIDS患者继发荚膜组织胞浆菌病。

肺孢子菌肺炎、弓形虫病和荚膜组织胞浆菌病的患者在临床上均表现出发热、咳嗽及呼吸困难等症状，感染程度不同临床表现的严重程度不一，影像学上也很难进行区分，患者耽误治疗会引起爆发性肺炎甚至死亡，因此，在临床上明确诊断感染病原体对于指导临床医生用药以及患者的良好预后具有重要意义。

发明内容

本发明依据耶氏肺孢子菌mtSSU（线粒体小亚单位）基因以及弓形虫的REP-529(529bp的重复片段)片段的保守区域和荚膜组织胞浆菌的ITS（internal transcribedspacer，转录间隔区）片段的保守区域设计了特异性引物、探针，构建了三重荧光定量PCR的鉴别诊断检测体系，并制备成肺孢子菌肺炎、弓形虫病和荚膜组织胞浆菌病的检测试剂盒或芯片。该检测试剂盒或芯片能同时或单独检测三种病原体，提高了疾病的诊断效率，降低医务人员的工作强度，提高了患者的治疗效果。

本发明提供了一种检测试剂盒或芯片，所述的检测试剂盒或芯片包含耶氏肺孢子菌、弓形虫和/或荚膜组织胞浆菌的引物和/或探针。

优选的，耶氏肺孢子菌的引物与探针扩增或靶向mtSSU基因。进一步优选的，耶氏肺孢子菌的探针包含SEQ ID NO：3所示核苷酸序列或者包含SEQ ID NO：3经过一个或几个核苷酸的取代、缺失和/或插入且与SEQ ID NO：3具有相同或相似功能的核苷酸序列，上游引物包含SEQ ID NO：1所示核苷酸序列或者包含SEQ ID NO：1经过一个或几个核苷酸的取代、缺失和/或插入且与SEQ ID NO：1具有相同或相似功能的核苷酸序列，下游引物包含SEQID NO：2所示核苷酸序列或者包含SEQ ID NO：2经过一个或几个核苷酸的取代、缺失和/或插入且与SEQ ID NO：2具有相同或相似功能的核苷酸序列。更进一步优选的，耶氏肺孢子菌的探针如SEQ ID NO：3所示，上游引物如SEQ ID NO：1所示，下游引物如SEQ ID NO：2所示。