[发明专利]拟南芥抗病相关激素IAA和SA高灵敏多通量检测方法

权利要求书

1.拟南芥抗病相关激素IAA和SA高灵敏多通量检测方法，该方法包括不锈钢电极的制备、拟南芥叶片样品的处理、IAA与SA激素含量的标准曲线制作和拟南芥叶片样品中IAA与SA激素含量的电化学检测；其特征在于：所述不锈钢电极采用液体碳导电胶进行改良修饰，集成在拟南芥叶片多个组织部位；该方法具体包括如下步骤：

（1）不锈钢电极的制备：用液体碳胶修饰不锈钢电极，将其晾干后再用透明胶带固定其检测面积，得到液体碳导电胶修饰的不锈钢电极；

（2）拟南芥叶片样品的处理：培养拟南芥植株，喷洒细菌浸染液模拟感染过程，并设置对照组，培养好后取样，将拟南芥叶片样品放置液体碳导电胶修饰的不锈钢电极上待检测；

（3）IAA与SA激素含量标准曲线的制作；

（4）拟南芥叶片样品中IAA与SA激素含量的电化学检测：将放置有拟南芥叶片的液体碳导电胶修饰的不锈钢电极与多通道电化学工作站相连，对拟南芥叶片中IAA和SA进高灵敏多通量检测。

2.根据权利要求1所述的拟南芥抗病相关激素IAA和SA高灵敏多通量检测方法，其特征在于：所述步骤（1）中用液体碳胶修饰不锈钢电极的过程具体包括如下步骤：

①将剪好的长1-3cm、宽0.6-1cm的不锈钢片放入烧杯中，依次往烧杯中倒入丙酮、乙醇和蒸馏水，进行8-12min超声浸泡处理，其中加入丙酮这一步烧杯口用保鲜膜封口；

②将处理好的不锈钢片放入烘箱中，在40-60℃条件下烘干20-40min；

③将烘干的不锈钢片取出，直接滴加质量比为1:5的液体碳导电胶并晾干；

④将晾干的液体碳导电胶修饰的不锈钢电极贴上透明胶带，备用。

3.根据权利要求1所述的拟南芥抗病相关激素IAA和SA高灵敏多通量检测方法，其特征在于：所述步骤（2）中拟南芥叶片样品的处理具体包括如下步骤：

①以野生型拟南芥种子为材料，用75%乙醇浸泡20min，然后用无菌水反复冲洗20min，共4次；洗涤后的种子在4℃下保存2d，然后放在1%蔗糖、1%琼脂和0.5g/L MES，pH5.8的1/2MS基本培养基上萌发，得到拟南芥幼苗；再将拟南芥幼苗在22℃的条件下培养，采用-5000Lux冷白荧光灯光照16h，暗光照8h，在植物组织培养室内培养4周，得到培养好的拟南芥植株；

②制备Pst DC3000菌浸染液，将其喷洒在步骤①中培养好的拟南芥叶片上为实验组，同时直接将相同质量的MgCl₂溶液接种到拟南芥叶片上作为对照组，实验组和对照组各准备10株，放入透明收纳箱中保湿培养；

③分别将实验组和对照组中接种过的拟南芥叶片用3-5mm的打孔器打孔，每个叶片在相同的位置打孔取样，将拟南芥叶片样品放置液体碳导电胶修饰的不锈钢电极上，用移液枪滴加4-16μL的缓冲液，盖上圆形滤纸片，待检测。

4.根据权利要求1所述的拟南芥抗病相关激素IAA和SA高灵敏多通量检测方法，其特征在于：所述步骤（2）中的缓冲液是0.2M，PH为7.5的PBS缓冲溶液，其配制方法为：依次配制0.2mol/L的K₂HPO₄溶液和KH₂PO₄溶液，将K₂HPO₄溶液KH₂PO₄溶液进行混合，调节PH至7.5。

5.根据权利要求1所述的拟南芥抗病相关激素IAA和SA高灵敏多通量检测方法，其特征在于：所述步骤（2）中拟南芥叶片覆盖在液体碳导电胶修饰的不锈钢电极未贴透明胶带处。

6.根据权利要求1所述的拟南芥抗病相关激素IAA和SA高灵敏多通量检测方法，其特征在于：所述步骤（3）IAA与SA激素含量标准曲线的制作具体包括如下步骤：分别制备梯度浓度为0.01μM、0.05μM、0.1μM、0.5μM、1μM、5μM、10μM、30μM、50μM、100μM的IAA与SA激素标准溶液，采用DPV差分脉冲伏安法测量标准溶液，得到IAA与SA激素DPV图，并分别根据DPV图中的数据计算得到IAA与SA激素含量标准曲线图。

7.根据权利要求1所述的拟南芥抗病相关激素IAA和SA高灵敏多通量检测方法，其特征在于：所述步骤（4）中的电化学工作站是8通道的电化学工作站。