[发明专利]一种用硅藻土固定芽孢杆菌发酵生产杆菌霉素D的方法

权利要求书

1.一种用硅藻土固定芽孢杆菌发酵生产杆菌霉素D的方法，其特征在于，是指在保藏号为CGMCC No.0943的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)fmbJ发酵过程中加入硅藻土进行固定化发酵，获得发酵上清液和沉淀物发酵残渣，用发酵上清液生产杆菌霉素D的方法。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，将所述的含菌量为10⁸CFU/mL枯草芽孢杆菌fmbJ接种于Landy培养基，接种量为1-10％(体积比)，33℃、180rpm条件下进行发酵，发酵至0-36h时添加硅藻土继续发酵至72h，添加硅藻土的质量比为0-5wt％，将第一次发酵完成的菌液4℃、5000g离心15min，取上清液用于生产杆菌霉素D，沉淀物用于下一次继续发酵；

在第一次发酵沉淀物中继续添加与第一次发酵等量的新鲜的Landy培养基进行二次发酵；

第三次发酵操作同第二次发酵操作相同；

采用酸沉的方法提取三次发酵上清液中的杆菌霉素D，即为生产的杆菌霉素D。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，优选含菌量为10⁸CFU/mL的枯草芽孢杆菌fmbJ接种于Landy培养基，接种量为3-8％(体积比)，33℃、180rpm条件下进行发酵，发酵至6-24h时添加硅藻土继续发酵至72h，添加硅藻土的质量比为0-2wt％。

4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于，进一步优选含菌量为10⁸CFU/mL的枯草芽孢杆菌fmbJ接种于Landy培养基，接种量为4-6％(体积比)，33℃、180rpm条件下进行发酵，发酵至12-24h时添加硅藻土继续发酵至72h，添加硅藻土的质量比为0.2-0.8wt％。

5.用权利要求1-4之一所述的方法生产的杆菌霉素D。

6.权利要求5所述杆菌霉素D的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，是指杆菌霉素D在粮食贮藏、果蔬保鲜、医疗或动物饲料方面的应用。

8.用权利要求1-4之一所述方法生产的微生物制剂，其特征在于，将所述的沉淀物发酵残渣烘干得到微生物制剂，干燥的温度30-70℃。

9.权利要求8所述微生物制剂的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，是指微生物制剂在粮食贮藏、果蔬保鲜以及动物饲料方面的应用。