[发明专利]利用温敏型启动子高效表达乳铁蛋白的菌株及其构建方法与应用有效
| 申请号： | 202210492068.0 | 申请日： | 2022-05-05 |
| 公开（公告）号： | CN114672449B | 公开（公告）日： | 2023-09-05 |
| 发明（设计）人： | 吕雪芹;刘龙;陈坚;堵国成;李江华;刘延峰;崔世修 | 申请（专利权）人： | 江南大学;白马未来食品研究院 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/70;C12N15/67;C12N15/12;C07K14/79;C12R1/19 |
| 代理公司： | 苏州市中南伟业知识产权代理事务所(普通合伙) 32257 | 代理人： | 王玉仙 |
| 地址： | 214122 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 利用 温敏型 启动子 高效 表达 铁蛋白 菌株 及其 构建 方法 应用 | ||
1.一种利用温敏型启动子高效表达乳铁蛋白的菌株，其特征在于，所述的菌株以大肠杆菌为宿主异源表达人乳铁蛋白和阻遏蛋白CI857，其中，所述的人乳铁蛋白通过改造后的Ppr启动子启动表达：
所述改造为，对SEQ ID NO.3所示的Ppr启动子进行改造，将其中SEQ ID NO.4、SEQ IDNO.5和SEQ ID NO.6所示的三个阻遏蛋白CI857的结合位点之间的间隔序列替换为SEQ IDNO.9所示的核苷酸序列；
所述的阻遏蛋白CI857的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，该阻遏蛋白CI857通过P43启动子控制表达；
所述的人乳铁蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.根据权利要求1所述的菌株，其特征在于，所述的人乳铁蛋白和改造后的Ppr启动子整合在质粒peT20b上。
3.根据权利要求1所述的菌株，其特征在于，所述的宿主为大肠杆菌BL21。
4.一种权利要求1~3任一项所述的菌株的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、将人乳铁蛋白编码基因和Ppr启动子序列、阻遏蛋白CI857和P43启动子整合至质粒peT20b上；
S2、在Ppr启动子上三个阻遏蛋白CI857的结合位点之间分别插入间隔序列，获得重组质粒；
S3、将重组质粒转化至大肠杆菌宿主中，获得所述的菌株。
5.权利要求1~3任一项所述的菌株在发酵生产乳铁蛋白中的应用。
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