[发明专利]一种真菌病毒VpFV1、一种弱毒性菌株及其应用

说明书

本发明公开一种从梨树腐烂病菌(Valsa pyri)中分离的新病毒，命名为Valsa pyri fusarivirus 1(VpFV1)，其核苷酸序列如SEQ ID 1，具有抑制宿主致病力的作用。采用对峙培养及RNA介导原生质体转染的方法，VpFV1均能克服菌丝不亲和性及不依赖菌丝可在细胞外存在，证实其传染不同种类腐烂病菌，引起宿主腐烂病菌株弱毒特性。通过将含有病毒VpFV1的弱毒性YN‑3菌株与无毒菌株对峙培养接种，以及YN‑3菌株发酵液与其他种类腐烂病菌菌株共培养接种梨离体枝条，致病力测定均显示经过YN‑3菌株及其发酵液处理后其他腐烂病菌菌株的致病力均出现下降，证明YN‑3菌株具有良好的生防潜力，可用于梨腐烂病害的生物防治。

技术领域

本发明属于植物病害生物防治技术领域，涉及一种真菌病毒VpFV1、一种弱毒性菌株及其应用。

背景技术

梨是一种世界性水果，在我国的种植面积和产量均位于世界首位。随着梨树栽培面积的扩大、配套管理技术不当、自然灾害连续发生等原因，使梨树面临严重的病虫害威胁。其中，梨树腐烂病的发生尤为严重，在我国梨主产区均有发生，尤以新疆、西北、华北、东北等地发生严重。其主要危害梨树的主枝和侧枝，且发病率高、难以控制，严重时还会造成大量死树或毁园(程栎菁，2012；周玉霞2013)。

研究发现一些真菌病毒的存在会使致病性真菌降低对植物的危害程度，如在板栗疫病中发现的真菌病毒可以使板栗疫病的致病力降低,在北美和欧洲板栗疫病的防治中起到了关键作用(Biraghi 1953,MacDonald and Fulbright 1991,Choi and Nuss 1992)；在白纹羽病菌中发现的病毒Rosellinia necatrix megabirnavirus 1(RnMBV1)能减慢病菌生长速度，降低病菌对宿主的影响,具有潜在的生防能力(Kondo et al 2013)；在梨轮纹病菌中发现的产黄青霉病毒Botryosphaeria dothidea Chrysovirus 1(BdCV1)引起梨轮纹菌的生长速率减慢、致病力减弱，具有弱毒特性(Wang et al 2014)。有研究发现从分离于河南郑州的一株气生菌丝稀少、致病力丧失的梨轮纹病和干腐病菌株YZN115中发现了一种新的dsRNA病毒BdRV1/YZN115通过分生孢子和菌丝进行接触传播，得到的传毒衍生菌株表现出生长异常及致病力丧失的特性(翟立峰，2016)。近年来，越来越多的真菌病毒被报道能够影响宿主的致病力，这些弱毒相关真菌病毒的发现为果树真菌病害的生物防治提供了新的思路(Xie and Jiang 2014,Kotta-Loizou，2021)。因此，植物病原真菌弱毒病毒应用成为生物防治领域一种新型资源，弱病毒侵染真菌的强毒力菌株以后，若菌株之间能克服菌丝不亲和性融合进行水平传播，很快便能形成一个弱毒力真菌群体，能够有效地在田间持久定植，并且可以继续传播，从而可持续性防治。

目前，梨腐烂病的防治主要依靠化学药剂的使用，长期使用化学药剂不仅会使梨果实的品质降低，同时还会给环境带来很大的影响(曹克强，2009)。所以急需一种既可以有效防治梨腐烂病，又不会对食用者和环境带来不良影响的生物防治措施。据报道仅有一例苹果腐烂病菌在自然侵染状态下携带真菌病毒Valsa ceratosperma hypovirus 1(VcHV1)的报道，对菌株致病力没有影响(Yaegashi et al 2012)，目前，梨腐烂病菌自然侵染状态下未有真菌病毒感染及其影响菌株致病力的报道。

弱毒病毒的利用，可以减少施用化学农药，降低种植成本，避免植物病原真菌抗药性的产生，有利于维持生态平衡。发现和挖掘梨腐烂病菌中携带的真菌病毒种类，明确所携带真菌病毒的生物学特性以及其对宿主菌株致病性的影响，筛选出携带真菌病毒的弱致病力菌株，为有效用于田间绿色防治梨腐烂病菌提供重要的候选材料。该项工作对利用真菌病毒对梨腐烂病菌进行生物防治起到关键作用，在未报道任何相关研究的基础上开展该项工作具有开创性和重大意义。

发明内容