[发明专利]一种构建具有高同源重组效率的嗜热毁丝霉菌株的方法及其应用在审
| 申请号： | 202210501195.2 | 申请日： | 2022-05-10 |
| 公开（公告）号： | CN114591849A | 公开（公告）日： | 2022-06-07 |
| 发明（设计）人： | 秦星;罗会颖;杨坤;李金阳;王晓璐;涂涛;苏小运;张杰;黄火清;柏映国;王苑;王亚茹;姚斌 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 |
| 主分类号： | C12N1/15 | 分类号： | C12N1/15;C12N15/113;C12N9/22;C12R1/645 |
| 代理公司： | 北京法信智言知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 11737 | 代理人： | 尹超群 |
| 地址： | 100193 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 构建 具有 同源 重组 效率 嗜热毁丝 霉菌 方法 及其 应用 | ||
1.一种构建具有高同源重组效率的嗜热毁丝霉菌株的方法，其特征在于，所述方法包括敲除嗜热毁丝霉的Ku80基因的步骤，其中，所述Ku80基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
2.根据权利要求1所述的构建具有高同源重组效率的嗜热毁丝霉菌株的方法，其特征在于，所述方法包括构建所述Ku80基因敲除盒的步骤。
3.根据权利要求2所述的构建具有高同源重组效率的嗜热毁丝霉菌株的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
以嗜热毁丝霉为出发菌株制备原生质体；
制备Ku80基因敲除盒；
将Ku80基因敲除盒导入制备的原生质体中；
在培养基上进行培养和筛选。
4.根据权利要求3所述的构建具有高同源重组效率的嗜热毁丝霉菌株的方法，其特征在于，通过CRISPR-Cas9基因编辑系统将Ku80基因敲除盒导入原生质体。
5.根据权利要求1所述的构建具有高同源重组效率的嗜热毁丝霉菌株的方法，其特征在于，所述嗜热毁丝霉为菌株ATCC4246。
6.一种提高嗜热毁丝霉CRISPR-Cas9基因编辑系统的同源重组效率的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
敲除嗜热毁丝霉的Ku80基因，所述Ku80基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；
制备缺失Ku80基因的嗜热毁丝霉菌株的原生质体；
将目的基因敲除盒、Cas9和sgRNA导入所述缺失Ku80基因的嗜热毁丝霉菌株的原生质体中，在含有抗生素的培养基上进行培养和筛选。
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