[发明专利]基于TIP-1-多肽相互作用的新型分子胶水

说明书

本发明公开一种基于TIP‑1‑多肽相互作用的新型分子胶水及其在蛋白非共价偶联中的应用，分子胶水包括能够特异性结合的TIP‑1蛋白和β‑catenin蛋白的C末端多肽，经测试可知，二者的亲和力达到了0.41μM，TIP‑1蛋白能够以异常高的亲和力专一性地结合β‑catenin蛋白的C末端多肽；将分子胶水的两个组分分别连接在两个待连接的蛋白上，则能够实现这两个蛋白的非共价偶联，尤其用于疏水特性显著的膜蛋白时，也能够实现高效特异性的非共价偶联，从而介导膜蛋白复合物中不同组分之间的相互作用。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其是涉及一种基于TIP-1-多肽相互作用的新型分子胶水。

背景技术

膜蛋白与普通的水溶性蛋白之间性质相差比较大。膜蛋白需要在溶液中存在一定浓度的去污剂才能稳定。去污剂在溶液中形成胶束，包围住膜蛋白的疏水性表明区域，形成膜蛋白-去污剂胶束复合物，这样膜蛋白才能在离开膜的天然环境稳定存在在溶液中。由于去污剂具有一定的疏水性，很大程度上减弱了两个膜蛋白之间的相互作用力。因此，体外重组膜蛋白复合物的时候，经常需要用到分子胶水帮助复合物的各个组分提高相互间的亲和力。这些工具需要满足以下条件：1，高稳定性。在多种不同条件下能够保持构象的完整性；2，结合力高。在去污剂条件下，也能有很高的亲和力；3，不干扰生物学功能。工具本身没有生物学活性，不会诱导其他蛋白的构象变化；4，非共价耦联。在需要的时候，可以借助条件变化来打开两个蛋白之间的耦联。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供一种基于TIP-1-多肽相互作用的新型分子胶水。

本发明采用的技术方案是：基于TIP-1-多肽相互作用的新型分子胶水，包括能够特异性结合的TIP-1蛋白和β-catenin蛋白的C末端多肽。

优选地，TIP-1蛋白序列如SEQ ID NO.1所示，β-catenin蛋白的C末端多肽序列如SEQ ID NO.2所示。

SEQ ID NO.1：

MSYIPGQPVTAVVQRVEIHKLRQGENLILGFSIGGGIDQDPSQNPFSEDKTDKGIYVTRVSEGGPAEIAGLQIGDKIMQVNGWDMTMVTHDQARKRLTKRSEEVVRLLVTRQSLQKAVQQSMLS

SEQ ID NO.2：QLAWFDTDL

新型分子胶水在蛋白非共价偶联中的应用。

优选地，用于膜蛋白间的非共价偶联。

优选地，TIP-1蛋白连接在第一蛋白的N端或C端；β-catenin蛋白的C末端多肽连接第二蛋白的C端，第一蛋白与第二蛋白非共价偶联。

本发明具有的优点和积极效果是：TIP-1能够以异常高的亲和力专一性地结合β-catenin蛋白的C末端，TIP-1和多肽的相互作用可以用来作为分子胶水来介导膜蛋白复合物中不同组分之间的相互作用。

附图说明

图1是实施例1中TIP-1重组蛋白的考马斯亮蓝G250染色图；

图2是实施例1中示意图ITC滴定结果图；

图3是实施例2中分子胶水质粒构建示意图；

图4是实施例2中膜蛋白复合物亲和纯化考马斯亮蓝G250染色图；M为标准分子量，L为细胞裂解液，FT为上亲和柱后没有柱子的流穿溶液，E1和E2为洗脱液；B为亲和柱子残留；

图5是实施例2中分子胶水耦联的膜蛋白复合物亲和纯化考马斯亮蓝G250染色图；M为标准分子量，L为细胞裂解液，FT为上亲和柱后没有柱子的流穿溶液，E1-4为洗脱液；B为亲和柱子残留。

具体实施方式

下面结合附图对本发明的实施例做出说明。