[发明专利]一种活性提高的Vip3A突变蛋白及其应用

权利要求书

1.一种活性提高的Vip3A突变蛋白，所述突变蛋白与亲本Vip3A蛋白相比，在亲本Vip3A蛋白的结构域I和结构域II之间的氨基酸区域引入蛋白酶酶切位点，所述蛋白酶酶切位点选自R、A、D、E中的一种或任意几种氨基酸组合。

2.如权利要求1所述的Vip3A突变蛋白，其特征在于，所述Vip3A蛋白的结构域I为对应于SEQ ID No.1所示序列的第1位到第191位氨基酸的区域，所述Vip3A蛋白的结构域II为对应于SEQ ID No.1所示序列的第201位到第327位氨基酸的区域。

3.如权利要求2所述的Vip3A突变蛋白，其特征在于，所述突变蛋白与亲本Vip3A蛋白相比，在对应于SEQ ID No.1所示的第192位至第200位氨基酸的区域引入至少一种蛋白酶酶切位点；

优选的，所述引入至少一种蛋白酶酶切位点包括以下i-iii任一所述的方式：

i、将对应于SEQ ID No.1所示的第192位至第200位氨基酸区域的任一或任意几种氨基酸残基突变为蛋白酶酶切位点；

ii、在对应于SEQ ID No.1所示的第192位至第200位氨基酸区域的任意两个氨基酸之间添加蛋白酶酶切位点，或者在第192位氨基酸的N端添加蛋白酶酶切位点，或者在第200位氨基酸的C端添加蛋白酶酶切位点；

iii、采用i和ii组合的方式。

4.如权利要求1-3任一所述的Vip3A突变蛋白，其特征在于，所述蛋白酶酶切位点选自RA和/或DE的氨基酸组合。

5.编码权利要求1-4任一所述Vip3A突变蛋白的基因。

6.包含权利要求5所述基因的载体。

7.包含权利要求5所述基因或权利要求6所述载体的宿主细胞。

8.权利要求1-4任一所述的Vip3A突变蛋白，或权利要求5所述的基因，或权利要求6所述的载体，或权利要求7所述的宿主细胞在抑制/杀灭鳞翅目害虫中的应用；或者，在制备抗鳞翅目害虫的转基因植物中的应用。

9.一种提高鳞翅目害虫中肠蛋白酶对Vip3A蛋白的酶切效率的方法，所述方法包括对Vip3A蛋白进行突变得到Vip3A突变蛋白，进而将Vip3A突变蛋白与鳞翅目害虫中肠蛋白酶进行接触的步骤；所述Vip3A突变蛋白与亲本Vip3A蛋白相比，在亲本Vip3A蛋白的结构域I和结构域II之间引入蛋白酶酶切位点，所述蛋白酶酶切位点选自R、A、D、E中的一种或任意几种氨基酸组合。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述引入蛋白酶酶切位点包括：

将结构域I和结构域II之间的任一或任意几个氨基酸残基突变为蛋白酶酶切位点，或者，在结构域I和结构域II之间的任一或任意几个氨基酸的两端添加蛋白酶酶切位点。