[发明专利]一种腺毛委陵菜的组织培养方法

说明书

本发明提供一种腺毛委陵菜的组织培养方法，其特征在于，包括如下步骤：以幼嫩叶片为外植体，表面灭菌后接种于愈伤组织诱导培养基诱导出愈伤组织，诱导出的愈伤组织接种于不定芽分化培养基分化出不定芽，其中，所述的愈伤组织诱导培养基为MS+NAA0.1～05mg/L+TDZ0.1～1.0mg/L，所述的不定芽分化培养基为MS+NAA0.5mg/L+TDZ0.1～1.0mg/L。本发明首次在委陵菜属植物的组织培养的愈伤组织诱导阶段应用NAA+TDZ的激素组合，该诱导方法能使腺毛委陵菜叶片愈伤组织诱导率达到90.00％以上，且愈伤组织生长状态良好，培养后期表面可见明显芽点。使用本发明的愈伤组织分化培养基，可使分化率达到46.67％，且不定芽生长健壮，能够为腺毛委陵菜组培成功奠定良好基础。

技术领域

本发明属于植物组织培养领域，具体涉及一种腺毛委陵菜的组织培养方法。

背景技术

北京地处华北平原，属典型的北温带大陆性季风气候，夏季炎热多雨，冬季寒冷干燥，因而，可供选择的乡土绿化地被材料比较有限，其中，委陵菜属植物被认为是较为理想的北京绿化乡土地被。相关研究人员对北京地区各县区、城区各类园林绿地进行实地调查发现委陵菜属植物在园林应用中表现出了良好的生态效益和景观效果，但是所应用的委陵菜属植物较为单一，主要是匍枝委陵菜、鹅绒委陵菜和莓叶委陵菜三种。赵凡于2016年起开始对北京及其周边地区委陵菜属植物资源展开调查，探明北京及其周边地区现存委陵菜属草本植物20种(变种)，约占全国委陵菜属植物的1/4，但大部分植物资源处于野生状态。委陵菜属作为乡土地被植物极具发展潜力，前人研究发现委陵菜属植物在干旱或光照不足的环境下仍具有良好的观赏性，但繁殖技术方面缺乏系统性的研究限制了其在园林绿化中的推广应用。

笔者通过查阅文献发现，目前对委陵菜属植物的繁殖技术研究表现出2个单一性：一为研究物种单一，二为研究方式单一。现有关于委陵菜属植物繁殖技术研究的文献共计三十余篇，其中仅对十二种委陵菜进行了繁殖技术的探索，并且在物种选择上表现出高度的重合性，如绢毛匍匐委陵菜、鹅绒委陵菜及委陵菜原种多次出现。就组织培养技术而言，现有文献中仅对含委陵菜原种在内的6 种委陵菜进行了相关探索，在外植体选择上多利用茎尖、茎段；消毒剂均采用不同浓度的升汞；在诱导方式上常见以茎尖直接诱导产生不定芽；在愈伤组织诱导阶段6BA+2.4D为常见组合；在愈伤组织分化阶段多采用6BA+NAA或ZT+NAA。

腺毛委陵菜绿期在220以上，能够在全年超过60％的时间形成有效的地表覆盖，其次腺毛委陵菜花期集中在春季4-5月，花黄色，明艳精致，能够有效丰富春季植物群落下层的观赏性；在园林应用潜力上，前人研究结果表明，腺毛委陵菜常见生于上层有乔灌木遮挡的半荫环境中，可作为道旁林缘绿化的优良植物材料。

但是目前尚无针对腺毛委陵菜组织培养技术的相关研究，组织培养与传统的繁殖方式相比，具有所需原材料少、生长周期短、繁殖系数大、培养条件人为可控、隔绝自然条件干扰等突出优势，能够在短时间内培养大量性状一致的优质苗木，对乡土地被植物开发意义重大。作为委陵菜属内具有广阔应用前景的一种植物，认为开发腺毛委陵菜的组织培养途径能够为其规模化生产提供理论依据和技术支持，同时为其园林应用奠定坚实基础。

发明内容

为解决上述问题，本申请旨在提供一种腺毛委陵菜的组织培养方法。

本发明提供的腺毛委陵菜的组织培养方法，包括如下步骤：以幼嫩叶片为外植体，表面灭菌后接种于愈伤组织诱导培养基诱导出愈伤组织，诱导出的愈伤组织接种于不定芽分化培养基分化出不定芽，其中，所述的愈伤组织诱导培养基为 MS+NAA0.1～0.1～1.0mg/L+TDZ1.0 mg/L，所述的不定芽分化培养基为MS+NAA0.5mg/L+TDZ0.1～1.0mg/L。