[发明专利]用于鉴别山核桃品种的引物组合及其应用

说明书

本申请涉及生物技术领域，尤其涉及一种用于鉴别山核桃品种的引物组合及其应用。“波尼”、“威奇塔”、“金华”和“绿宙1号”是4个优良薄壳山核桃品种，其适应性强、推广面积大。然而这4个品种较难通过形态学的方式进行区分，本发明通过提供一组引物对，SEQIDNO.1‑3、SEQIDNO.3‑5、SEQIDNO.6‑8和SEQIDNO.9‑11，及其配套的扩增程序，可以有效辨别这4个山核桃品种，为实际生产和销售带来便利，同时该操作方法简单，且成本低廉。

技术领域

本申请涉及生物技术领域，尤其涉及一种用于鉴别山核桃品种的引物组合及其应用。

背景技术

薄壳山核桃(Carya illinoinensis)，是胡桃科(Juglandaceae)山核桃属(Carya)的落叶大乔木，也称美国山核桃，原产美州，世界著名生态经济型树种。株高可达50米；奇数羽状复叶；雄性柔荑花序3条1束，雌性穗状花序直立；果实矩圆状或长椭圆形。其果仁味美无涩、富含a-亚麻酸，且出油率高，是高档食用油。薄壳山核桃与20世纪初引入我国，其不仅具有很高的经济价值，而且其树形优美、叶片宽大易吸附微尘，因此兼具良好的生态效益。目前我国已有多个省市将薄壳山核桃列为重点推广发展的木本油料树种。

优良的薄壳山核桃品种苗，不仅生长速度快、结实早，而且果实大、稳产性强，这些优良品种主要通过嫁接的方式繁育。然而随着薄壳山核桃在我国种植面积的不断扩大，苗木销售市场也逐渐火热。市场上常见的4个品种：“波尼”、“威奇塔”、“金华”和“绿宙1号”在幼苗时难以区分，为生产和销售带来困扰。因此，有必要开发高效、精准的方法，区分这四个薄壳山核桃品种。

叶绿体是绿色植物中的核心细胞器，在光合作用及碳固定功能中起着至关重要的作用。并且，叶绿体基因组结构保守，遗传性变异小，基于这些特性叶绿体基因组越来越广泛地应用在系统发育分析、物种界定、纯度鉴定等方面。

发明内容

本申请提供了一种用于鉴别山核桃品种的引物组合及其应用，以解决无法经济快捷区分薄壳山核桃的品种的技术问题。

第一方面，本申请提供了用于鉴别山核桃品种的引物组合，所述引物组合包括引物组A，所述引物组A的核苷酸序列如SEQ ID NO.1-3所示。

可选的，所述引物组合还包括引物组B，所述引物组B的核苷酸序列如SEQ IDNO.3-5所示。

可选的，所述引物组合还包括引物组C，所述引物组B的核苷酸序列如SEQ IDNO.6-8所示。

可选的，所述引物组合还包括引物组D，所述引物组B的核苷酸序列如SEQ IDNO.9-11所示。

第二方面，本申请提供了第一方面所述的引物组合在制备检测山核桃品种的试剂盒中的应用。

第三方面，本申请提供了第一方面所述的引物组合在检测山核桃品种方法中的应用。

第四方面，本申请提供了检测山核桃品种的方法，所述方法包括使用第一方面所述的引物组合，并通过对PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳后的条带进行判断。

可选的，扩增反应中，引物组合的浓度为5-10μM，模板的浓度为0.5-1μg/μL。

可选的，所述扩增的温度为59-98℃。

可选的，所述扩增反应包括变性、退火和引物延伸；所述变性的温度为98℃；所述退火的温度为58-61℃；所述引物延伸的温度为72℃。

本申请实施例提供的上述技术方案与现有技术相比具有如下优点：